【摘 要】
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弓形虫(Toxoplasma gondii)可以寄生于人和动物体内,引起人兽共患病,且弓形虫在世界各地区都有分布。弓形虫宿主广泛,可以感染常见的家禽家畜,对畜牧业能造成严重的经济损失,
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弓形虫(Toxoplasma gondii)可以寄生于人和动物体内,引起人兽共患病,且弓形虫在世界各地区都有分布。弓形虫宿主广泛,可以感染常见的家禽家畜,对畜牧业能造成严重的经济损失,也威胁着人类的生命健康。因此,对畜禽的弓形虫检测和深入研究意义深远。人感染弓形虫主要途径是食用了含有弓形虫包囊的肉类产品。肉类产品中的鸡肉产品是我国民众主要的肉食之一,鸡肉的食品安全问题一直是大众关注的焦点,但鸡肉类产品的弓形虫感染情况报道很少。因为泰安市的鸡肉产品的弓形虫感染情况目前尚不明确,尚未见有报道,本研究立足于泰安市,进而展开了对泰安市肉鸡产品鸡心脏中弓形虫感染情况的检测,对鸡源性弓形虫展开了初步研究和了解。本研究可分为三个部分:第一部分以弓形虫ITS-1作为靶基因,建立了一种检测鸡肉类产品感染弓形虫情况的巢式PCR方法,并证明了与其他原虫无交叉反应,敏感性高于传统PCR 10~6倍,具有高度特异性和敏感性特点;利用该方法比较了试剂盒法和苯酚-氯仿法提取DNA的不同,得出结论试剂盒法提取的DNA纯度更高,更适合于酶切鉴定。为检测鸡肉产品的弓形虫感染做了前期准备。第二部分本研究从泰安市泰山区、岱岳区、新泰市、肥城市、东平县和宁阳县6个地区12个超市随机采集360份鸡心脏样本和12个市场随机采集360份鸡心脏样品,用所建立的巢式PCR方法,进行了分子生物学调查。结果显示,所有样本中检测出77份阳性样本,阳性率占10.7%;其中泰山区、岱岳区、新泰市、肥城市、宁阳县和东平县阳性的样本数(百分率)分别是15(12.5%)、7(5.8%)、21(17.5%)、17(14.2)、10(8.3%)、7(5.8%),阳性率范围在5.8%~17.5%,不同地区阳性率差异显著(P<0.05);超市阳性样本检出8份,市场阳性样本检出69份,其中新泰市超市阳性率最高,达8.3%,泰山区、岱岳区和宁阳县超市阳性率都为0,6个地区市场都有阳性样品检出,超市和市场阳性率差异极显著(P<0.01),表明泰安市鸡肉产品鸡心脏存在弓形虫感染,超市销售产品感染率不高。第三部分采用Mn-PCR-RFLP技术,选择弓形虫的两个基因位点SAG3和GRA6,对77份阳性样本进行了基因分型研究。结果表明,77份阳性样本都可以扩增出SAG3基因片段,SAG3基因型主要是Ⅰ型和Ⅰ/Ⅱ混合感染,占93.5%,同时发现一个非典型基因型,SAG3基因片段的250号碱基“T”点突变成“C”,没有充分证据说明是偶然因素影响还是属于一种全新的基因型,尚需要进一步的研究;77份阳性样本都可以扩增出GRA6基因片段,GRA6基因型主要是Ⅰ型,可达98.7%。就本研究而言,感染泰安市鸡肉食品的弓形虫基因型主要是Ⅰ型。
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