柑橘是世界上重要的水果,柑橘的无核及晚熟性状一直以来都是柑橘育种工作者重点关注内容。最近本课题组在福建省发现一个名为‘抛橘’的无核柑橘地方资源,其在当地具有近百年的种植历史,但文献未有记载。‘抛橘’具有果肉似橙,果皮有褶皱且易剥离,果实大小与葡萄柚相类似的特点,果实成熟期一般在次年一月中旬左右,可挂果至次年4月中旬,单果均重349.8g,可食率平均为45.9%,可溶性固形物含量为10.4%,可滴定酸含量为1.62%。综上,‘抛橘’具有较高的研究和开发价值。本课题研究以‘抛橘’为研究对象,从雌雄配子体育性等方面初步研究了‘抛橘’无核的原因;利用形态学观察和SSR标记对‘抛橘’进行遗传鉴定。取得的主要研究结果如下:一、‘抛橘’的雌雄配子体发育正常1.连续两年,观察花粉育性指数。使用醋酸洋红染色观察‘抛橘’的花粉染色活力,结果显示正常率均在80%以上;利用培养基上培养‘抛橘’花粉,结果显示萌芽率均在75%以上;利用血球计数板统计其每花药花粉量为2×104粒左右。2.解剖学结果表明:‘抛橘’雄配子体发育正常。扫描电镜结果显示‘抛橘’花粉形态正常,并且正常率可达到80%以上。3.石蜡切片观察:观察了‘抛橘’雌配子体的四个发育时期,未发现败育及畸形发育的情况;对‘抛橘’雄配子体的发育进行了观察,其发育正常。综上,‘抛橘’的无核原因可能为自交不亲和或胚胎败育。二、‘抛橘’的遗传鉴定1.7对cp SSR引物和13对nSSR引物分别对24和22个柑橘属及其近缘属植物进行了UPGMA聚类分析,推测:‘抛橘’是以柚类(Citrus maxima)×酸橙类(citrus aurantium)杂交而来。2.基因重测序数据分析显示:?基因重测序数据分析显示:‘抛橘’与酸橙的基因组序列相似度在85%以上,推测‘抛橘’可能属于酸橙的一种;尽管叶片形态、果实外形以及果肉质地和色泽与温州蜜柑相近,但与温州蜜柑基因组序列相似度只有63.49%,不能发现存在直接亲缘关系的证据。3.13对nSSR引物对38个柑橘属及其近缘属植物进行了UPGMA聚类分析,结果显示:‘抛橘’和代代酸橙有较密切的亲缘关系。推测:代代酸橙可能是‘抛橘’的一种类型或者是杂交亲本之一。三、q PCR检测4个与SI相关基因在‘抛橘’不同组织中的表达量结果显示:Cg Rns6、Cg Rns9、Cg Rns L在‘抛橘’不同组织中的表达没有规律,而Cg RNS3在‘抛橘’的雌蕊中特异性表达,表明‘抛橘’无核的原因可能是自交不亲和,而Cg RNS3可能是其自交不亲和的候选基因。