人脐带血来源的干细胞在HIE鼠脑内的定殖及分化

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[背景与目的]:在我国,每年出生的新生儿中,有7%—10%(140—200万)的新生儿发生窒息,30万左右的窒息儿出现不同程度的残疾,是引起新生儿死亡、小儿脑瘫的主要原因。降低HIE的死亡率、脑瘫等后遗症等发生率,可产生极大的社会、经济效益。HIE的治疗目前立足于用多种脑细胞活性药物,并通过康复锻炼促进其功能改善,但对已经死亡的脑细胞则无能为力。因此,用NSC促进神经元再生以达到修复作用成了一条新的治疗渠道。本研究基于前人研究的基础,以脐带血为研究对象,研究人脐带血间充质干细胞(MSCs)的生物学活性;建立可靠的缺氧缺血动物模型;探讨脐带血间充质干细胞移植在HIE鼠脑内后的定殖及向神经样细胞的分化情况。[方法]:用FACScan检测MSCs表面相关抗原CD29、CD44、CD59、CD33,用丹参诱导人脐血原代细胞向神经细胞方向分化,并用免疫细胞化学方法对细胞进行鉴定;结扎七日新生鼠左侧颈总动脉,缺氧3小时,观测缺氧过程中鼠的临床表现,缺氧后3天后作鼠脑组织切片,观察病理改变;用Hoechst33258标记细胞,37℃孵育24h,并在模型制作成功当天,立体定位注射或是通过尾静脉将细胞注射到实验鼠体内,14天后,将鼠脑制成10μm厚的冰冻切片,观察细胞的存活及分布情况,最后用双染法来检测干细胞的分化。[结果]:人脐血原代细胞中,MSCs的表面标记CD29、CD44、CD59的阳性率分别是10.7%、37.27%和66.67%;原代培养的贴壁细胞形态呈大小不等的圆形和条形,用丹参诱导,可表达神经细胞的标记,如神经干细胞标记nestin,神经元的标记β-Ⅲ类神经微管(β-TubulinⅢ)、神经微丝(NF)、神经胶质细胞的标记胶质纤维酸性蛋白(GFAP);缺氧20min后,动物烦躁不安,时间更长后,会依次表现出发绀、嗜睡、激惹、角弓反张等现象;HE染色,可观察到神经元细胞坏死、细胞核发生碎裂,溶解,这证明HIE模型建立成功;细胞孵育24h后,可看到干细胞发蓝光,观察冰冻切片时候可见到经立体注射的细胞主要成团分布在注射部位周围,而经外周注射的细胞主要
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