论文部分内容阅读
柑橘木虱Diaphorina citri(Kuwayama)属昆虫纲(Insecta)、半翅目(Hemiptera)、木虱科(Liviidae),是一种在世界上广泛分布的柑橘害虫。柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是全球柑橘生产上最具毁灭性的病害之一,而柑橘木虱就是传播柑橘黄龙病的重要媒介昆虫,因此,合理有效地防治柑橘木虱是防控柑橘黄龙病的关键。目前,柑橘木虱的防治主要依赖化学药剂,然而,频繁不合理地施用杀虫剂已经导致柑橘木虱对一些田间常用杀虫剂产生了抗药性。鉴于此,本论文系统测定了6种田间常用杀虫剂在不同温度下对柑橘木虱的毒力;进一步明确了亚致死浓度氟吡呋喃酮对柑橘木虱生殖发育的影响及其对柑橘木虱基因表达的影响,旨在探明氟吡呋喃酮对柑橘木虱的作用机制,为柑橘木虱的高效防控提供理论依据,同时为柑橘木虱抗药性机制研究提供参考。本论文获得的主要结果如下:1.不同温度下6种杀虫剂对柑橘木虱的毒力通过药膜法和叶片浸渍法分别测定了不同温度(18、22、26、30、34℃)下6种杀虫剂对柑橘木虱成虫和若虫(4-5龄)的毒力。结果表明:在18-34℃条件下,氟吡呋喃酮、螺虫乙酯和噻虫嗪对不同虫态柑橘木虱均呈现相同的规律。其中,氟吡呋喃酮随温度升高毒力略下降,但整体相对稳定;螺虫乙酯和噻虫嗪随温度升高毒力相应升高;联苯菊酯则不存在明显的规律。而呋虫胺和毒死蜱对不同虫态的柑橘木虱呈现不同的规律。呋虫胺和毒死蜱对柑橘木虱若虫的毒力分别随温度升高而升高或下降,而对成虫没有明显的规律。此外,在6种常用杀虫剂中,柑橘木虱成虫和若虫都对氟吡呋喃酮和联苯菊酯最敏感。2.氟吡呋喃酮亚致死浓度对柑橘木虱生殖发育的影响通过套袋法,用LC20和LC40浓度的氟吡呋喃酮处理柑橘木虱成虫,观察记录柑橘木虱产卵量、卵孵化率和发育历期。结果表明,在氟吡呋喃酮LC20和LC40浓度处理下,柑橘木虱产卵量和卵孵化率均显著降低;卵期稍有延长,但无显著差异性;若虫期显著延长。因此,氟吡呋喃酮对柑橘木虱的生殖发育会产生不利影响。3柑橘木虱响应氟吡呋喃酮胁迫的表达谱及相关差异基因分析本实验通过对柑橘木虱对照组和氟吡呋喃酮处理组两个样品进行转录组测序,分析得到了2028条差异表达基因,其中上调基因1433条,下调595条。共有2028条差异基因得到注释,其中在GO数据库有1133条得到注释,在KEGG数据库有847条得到注释。在差异表达基因中,与烟碱乙酰胆碱受体相关的基因有两条,与谷胱甘肽S-转移酶、ABC转运蛋白、羧酸酯酶相关的基因各有一条,其他的包括DCR1核糖核酸内切酶切酶、GDP-岩藻糖转运蛋白、U6 snRNA磷酸二酯酶、PAB依赖的poly(A)特异性核糖核酸酶、N-乙酰基转移酶相关基因各一条。对这些基因进行实时荧光定量PCR测定,结果显示,在浓度LC10、LC30和LC50处理柑橘木虱时,谷胱甘肽S-转移酶基因、烟碱乙酰胆碱受体基因和谷胱甘肽S-转移酶基因上调倍数最大,分别为2.24、16.31和4.77;而下调倍数最大的分别为羧酸酯酶基因、PAB依赖的poly(A)特异性核糖核酸酶基因和DCR1核糖核酸内切酶切酶基因,分别为13.70、30.03和9.92。说明柑橘木虱响应氟吡呋喃酮胁迫机制可能与这些基因有关。