目的1.建立天灸发泡大鼠模型。2.观察天灸对皮肤表皮层结构及炎性细胞浸润的动态影响。3.观察天灸后泡液与血清成分以及白细胞的动态变化。方法1.实验一用生药斑蝥粉制作不同浓度(5%斑蝥酊、10%斑蝥酊、20%斑蝥酊、30%斑蝥酊)的斑蝥酊溶液。32只雄性SD大鼠麻醉、脱毛,称取0.018克棉球填充于PU防水空白膏药贴中央。吸取200μl四种浓度的斑蝥酊均匀浸湿棉球后贴敷刺激,2h后加200μl斑蝥酊一次,密封覆盖,4h后统一收集泡液。通过观察发泡率、泡体大小、泡液量、泡液吸收情况、发泡区域皮肤变化情况、大鼠存活率情况以及发泡液内总细胞数量,筛选出斑蝥酊发泡的最佳浓度。2.实验二以上述实验一所选的斑蝥酊浓度,作为实验二中固定的刺激浓度。64只雄性SD大鼠在颈部脱毛4cm2,生理盐水清洁,室温26℃恒温台上安置。随机分为8组:空白对照组、95%酒精组、天灸4h组、天灸12h组、天灸24h组、天灸48h组、天灸72h组、天灸96h组,每组8只大鼠。(1)空白组大鼠正常给于饮食,不做干预。(2)95%酒精组大鼠用等体积95%酒精刺激大鼠皮肤表面,并防止挥发。(3)天灸4h组用200μl 5%斑蝥酊发泡,4h后抽取泡液保存,10%水合氯醛麻醉后腹主静脉采血处死,并取皮肤组织保存待检。(4)余下各组采取相同处理。(5)除空白组外,各组大鼠均单笼饲养。各组大鼠均采用HE染色、光学显微镜下观测皮肤表皮层结构和炎性细胞浸润的动态变化,并对皮肤刺激性进行观察评分、测量皮肤温度的变化;ELISA法检测大鼠血清和泡液中TNF-α含量;血常规观察大鼠天灸后血液中白细胞的变化情况。结果1.200μl 5%斑蝥酊发泡效果最好,大鼠存活率更高,发泡更稳定,大鼠不良反应更少,是发泡的最佳浓度。2.天灸后,大鼠皮肤表皮层增厚和肿胀,轻微发红,伴随水泡出现。3.斑蝥酊天灸对大鼠皮肤的刺激属于炎性刺激,具有明显“红”“肿”“热”和“痛”的特征。4.发泡液中TNF-α含量以24h组最高,提示24h时炎症反应处于过激状态。并且泡液相对于血液,炎症反应出现的更早,程度更显著。5.血液中白细胞数量及不同种类白细胞差异性大。结论1.采用200μl 5%的斑蝥酊结合PU防水贴棉球压充法可以制备一种稳定的天灸发泡大鼠模型。2.天灸发泡的性质是一种炎性刺激及疼痛刺激。3.天灸泡液相对于血液,其炎症反应出现的更早,程度更显著,并且24h时泡液炎症反应最显著。血液中免疫细胞的调节主要以白细胞为主,24h时升高最显著。