人工设计抗菌肽KL-18及其体外杀菌和抗瘤作用的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyutinglzl
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目的: 根据抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)结构和功能的关系,以新发现的抗菌肽LL-37为模板,从中选取其发挥抗菌作用必需的氨基酸序列,即其α-螺旋区域,对这段序列进行分析和个别氨基酸的替换,得到一种人工设计的新型抗菌肽,检测其抗菌效果,同时观察这种新型抗菌肽对肿瘤细胞的影响以判断其应用于肿瘤免疫中的前景。 方法: (1)在PubMed上找到LL-37的全长氨基酸序列,用蛋白质分析软件分析其结构,找出其发挥抗菌作用必需的α-螺旋序列,对α-螺旋序列进行疏水性以及螺旋形成等分析并替换部分氨基酸后送公司合成得到人工设计的新型抗菌肽: (2)选取大肠杆菌JM109,金黄色葡萄球菌临床株,白色葡萄球菌临床株,粪肠球菌耐氟喹诺酮类临床株,粪肠球菌ATCC29212标准株做为我们的研究对象,采用微量稀释法测定这种新型抗菌肽以及青霉素或者氨苄西林对他们的MIC值,并进行比较; (3)将这种新型抗菌肽分别与HepaG2细胞以及THP-1细胞在96孔板内共同孵育,收集不同浓度和不同时间段细胞培养液上清,检测这两株瘤细胞IL-8和TNF-α分泌量的变化,观察这种新型抗菌肽诱导这两株瘤细胞凋亡的作用。 结果: (1)在对LL-37氨基酸序列进行分析后找出了其中的α-螺旋序列,替换了其中的五个氨基酸,构建了理论上疏水性和抗菌能力更好的新型抗菌肽KL-18,并送公司合成,从而得到了这种新型的抗菌肽; (2)这种人工设计的新型抗菌肽具有很好的杀菌活性,除了对金黄色葡萄球菌的杀菌能力与青霉素相同外,它对我们所研究的其余四株菌株的杀菌能力要显著高于
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