干扰素γ及喜树碱对肺腺癌细胞株SPC-A1中CDA1表达的作用

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目的:(1)明确干扰素γ及喜树碱对肺腺癌细胞株SPC-A1中CDA1表达的影响。(2)探讨干扰素γ或/及喜树碱作用后CDA1与P53、P21、CyclinD1在SPC-A1细胞中的表达有无相关性。   方法:(1)人肺腺癌细胞株SPC-A1细胞体外培养,采用四唑盐(MTT)比色法,观察加入不同浓度喜树碱及干扰素γ12h、24h及48h前后细胞增殖变化情况。(2)运用Real time RT-PCR及Western blot法检测分别加入及共同加入干扰素γ及喜树碱干预前后CDA1、P53、P21、CyclinD1 mRNA及蛋白的表达情况,并从蛋白质水平分析其相关性。   结果:(1)MTT比色法结果显示:分别加入不同浓度喜树碱及干扰素γ12h、24h及48h后,SPC-A1细胞增殖均不同程度地受到抑制;同时加入一定浓度的喜树碱和干扰素γ后,细胞增殖与单独加入干扰素γ及喜树碱组相比出现进一步抑制(P<0.05)。   (2)Real time RT-PCR和Western blot法检测显示:SPC-A1细胞中单独加入喜树碱24小时后,CDA1mRNA及蛋白的表达均增加(P<0.05);同时加入干扰素γ及喜树碱24小时后,CDAl表达进一步增加(P<0.05)。SPC-A1细胞中单独加入干扰素γ1小时后,CDA1mRNA即开始出现表达增加(P<0.01),而CyclinD1mRNA的表达出现减少(P<0.05),此时P21、P53的表达未见明显改变(P>0.05);24小时后,CDA1mRNA及蛋白的表达进一步增加,伴随着P21、P53mRNA及蛋白表达增加及CyclinD1表达减少(P<0.05)。(3)在SPC-A1细胞中加入干扰素γ及喜树碱前后,CDA1与P53蛋白表达呈正相关(r=0.853),与P21蛋白表达呈正相关(r=0.797),与CyclinD1蛋白的表达呈负相关(r=0.939)。   结论:(1)CDA1在肺腺癌SPC-A1细胞株中呈低水平表达,分别加入及联合加入干扰素γ及喜树碱导致细胞增殖抑制时CDA1出现高表达。(2)在肺腺癌细胞株SPC-A1中,CDA1与P53、P21蛋白的表达呈正相关,与CyclinD1蛋白的表达呈负相关。(3)干扰素γ及喜树碱可能通过促进肺腺癌细胞株SPC-A1中CDA1高表达,增加了P53、P21的表达,降低了CyclinD1的表达,从而实现了细胞增殖抑制。由此推测CDA1可能在肺腺癌发生、发展及转归中有重要作用。
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