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目的:神经胶质瘤又称胶质细胞瘤,简称胶质瘤,发生于神经外胚层,是最常见的颅内肿瘤,占全部脑肿瘤的33.3~58.6%。据相关文献报道,神经胶质瘤的发病率为3~10人/10万人,占全身恶性肿瘤的1%~3%,神经胶质瘤侵袭性很强,绝大多数病人预后很差,即使采取外科手术、放疗及化疗等综合疗法,中位数存活期仍不超过14个月,因此对于胶质瘤的研究是一个非常重要的课题。随着研究的进展,人们将会对胶质瘤的发生发展机制有更深入的认识,为早期诊断胶质瘤提供新的生物标记物,并为胶质瘤的治疗提供新的靶点以及理论基础。近几年,随着新技术的应用,先前的认知正被逐渐颠覆,从全基因组和转录组测序分析得出,有机体的复杂程度可能是由非编码RNA调控的,这属于基因组的非编码部分。因此,如今的研究重心逐渐转移到了一个最普遍但缺乏认知的RNA种类:LncRNA。LncRNA常常是这样定义的:一个不编码蛋白质的RNA分子,其长度超过200个核苷酸。近年来我们识别了数量巨大的lnc RNA,接下来需要进一步探究lnc RNA的细胞功能。过去十年,学界的共识是这些大分子转录物仅仅是所谓的“转录噪声”或克隆产物。但是,大量的lnc RNA表现出了精确的生物调控性或是明确的进化保守性,这就支持一个假说:这些转录物具有重要的功能。事实上,近年来的研究了覆盖了大量lnc RNA,许多都起到了重要的调控功能。LncRNA DILC是近来经由高通量测序以及Q-PCR确认及验证的长链非编码RNA,研究发现,DILC在肝癌中通过抑制自分泌IL-6/STAT3轴来抑制肝癌干细胞的自我更新,DILC在肝癌干细胞中是明显下调的,而DILC又会抑制肝癌干细胞的扩增,动物实验发现,DILC的敲除会进一步促进肝细胞癌的发生发展,研究显示,DILC通过抑制JAK2/STAT3的活化来约束肝癌干细胞的扩增,其中DILC调节了IL-6/JAK2/STAT3的自分泌信号传递,下调DILC时可以发现,IL-6的自分泌信号传递会变得更活跃,由此也会进一步增强IL-6/STAT3通路的活化。而IL-6与大量恶性肿瘤的发生发展相关,在神经胶质瘤中,IL-6的水平是明显上升的,敲除IL-6的胶质瘤细胞其细胞生长明显受限,大量的统计显示IL-6水平明显上升的神经胶质瘤患者预后很差,同时其肿瘤侵袭性很强。截至目前,没有研究指出DILC在神经胶质瘤中的表达水平及其扮演的角色,而有关DILC与IL-6/STAT3信号级联的关系的报道使得DILC在神经胶质瘤中具有差异化表达以及一定调控功能的预期变得很具前景。因此,本研究通过Q-PCR技术检测DILC在正常脑组织及不同级别神经胶质瘤中的表达情况,阐述DILC在正常脑组织及不同级别神经胶质瘤中的表达差异及其与肿瘤级别的关联性,同时构建小干扰RNA,转染胶质瘤细胞U87、U251,通过克隆形成实验,CCK-8细胞增殖活力分析观察DILC对于胶质瘤细胞生物学功能的影响,并探讨可能的作用机制。方法:1临床标本的采集:从河北医科大学附属第二医院神经外科采集近一年的不同级别神经胶质瘤及正常脑组织的标本。以2007年WHO标准病理分级为标准,采集I-Ⅳ级的神经胶质瘤标本共36例,其中I-II级、III级、IV级神经胶质瘤标本分别为23例、7例、6例,同时取正常脑组织标本7例(对照用)。2临床标本的检测与分析:从Gene Bank调取DILC全长序列,设计引物,采用Q-PCR技术从RNA水平定量检测DILC在正常脑组织及不同级别胶质瘤的表达情况。3构建小干扰RNA,转染胶质瘤细胞U87、U251,通过克隆形成实验,CCK-8细胞增殖活力分析的方法观察DILC对胶质瘤细胞增殖功能的影响。4应用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行统计学分析。结果:应用Q-PCR方法,在经过对实验组神经胶质瘤及正常脑组织标本细胞总RNA进行提取、纯度检测(1.8<A260/A280<2.1)、完整性鉴定(28s和18s RNA清晰带)、扩增目的基因DILC及带荧光的扩增酶标记后,应用spss13.0统计学软件进行统计学分析结果显示,lnc RNA DILC在胶质瘤组中的表达与正常脑组织组相比明显降低,且P值均小于0.05,差异有统计学意义;组间比较显示在不同级别神经胶质瘤中(I-II级、III级、IV级)lnc RNA DILC的表达随着肿瘤级别的增加呈现递减趋势,差异有统计学意义,P值均小于0.05。上述研究结果在表明,神经胶质瘤中lnc RNA的表达水平较正常脑组织明显降低,且胶质瘤的级别越高表达水平越低,呈现递减趋势。构建小干扰RNA,转染胶质瘤细胞U87、U251,经由Q-PCR验证细胞模型构建成功后,进行克隆形成实验以及CCK-8增殖活力分析,结果表明,与对照组细胞相比,DILC敲低后的胶质瘤细胞克隆形成能力减弱,克隆形成数目增加;CCK-8检测表明,DILC可以加速实验组细胞的增殖。结论:1 DILC在神经胶质瘤中的表达水平较正常脑组织较低,在不同级别神经胶质瘤中表达水平存在明显差异,随着神经胶质瘤级别的升高而呈现递减趋势,与恶性程度密切相关。2 DILC可能与胶质瘤细胞的增殖直接相关,DILC的敲低可以使胶质瘤细胞的增殖水平上升。