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目的:探讨盐霉素对前列腺癌细胞DU145体外细胞克隆形成的影响及及其分子机制,为开发应用盐霉素治疗前列腺癌提供理论依据。方法:(1)用不同浓度盐霉素(0、0.25uM、0.5u M、1.0Um、2.0Um、4uM)及GSK抑制剂、紫杉醇、雷帕霉素、盐霉素分别处理对数生长期DU145细胞,观察其形成的体外克隆数目;(2)盐霉素处理对数生长期DU145细胞,实验分为DEAB组(阴性对照组)、DMSO组及盐霉素5uM组,ALDH为标记物,用流式细胞仪检测盐霉素处理后DU145细胞干细胞百分比;(3)盐霉素与紫杉醇、雷帕霉素、GSK抑制剂分别处理对数期DU145细胞,实验分为DEAB组(阴性对照组)、DMSO组、紫杉醇5nM组、盐霉素5nM+GSK3β抑制剂5uM组、盐霉素5uM+紫杉醇5nM、盐霉素5uM+雷帕霉素100nM组、盐霉素5uM组,分别于对数期处理DU145细胞,以ALDH为标记物,用流式细胞仪检测各药物处理后DU145细胞干细胞百分比;(4)不同浓度盐霉素及同一浓度盐霉素不同处理时间分别处理对数生长期DU145细胞,用western-Blot法检测盐霉素处理后DU145细胞GSK-3β、β-catenin、c-Myc、CyclinD1、m-TOR、p70s6k、p-s6等蛋白的表达变化。结果:(1)盐霉素对DU145克隆形成数目的影响:浓度为0、0.25uM、0.5uM、1.0uM、2.0uM、4.0u M处理组,各处理组形成的集落数分别是:119、86、67、53、31和3个;空白对照组、盐霉素、GSK抑制剂、盐霉素+雷帕霉素、紫杉醇、雷帕霉素组形成克集落分别为123、1、115、0、119,67个。(2)盐霉素对DU145干细胞的抑制作用:结果显示DEAB(阴性对照组)组肿瘤干细胞比例为0.140%,DMSO处理组肿瘤干细胞比例为13.4%、盐霉素5uM处理组干细胞比例为2.97%。(3)盐霉素与其他临床常用抗肿瘤药物对DU145干细胞影响的比较:DEAB(阴性对照)组干细胞比例为0.160%、DMSO组干细胞比例为7.71%、紫杉醇5nM组干细胞比例为6.59%、盐霉素5uM+紫杉醇5nM组肿瘤干细胞比例为2.01%、盐霉素5nM+GSK3β抑制剂5uM组肿瘤干细胞比例为2.08%、盐霉素5uM+雷帕霉素100nM组肿瘤干细胞比例为1.70%、盐霉素5uM组肿瘤干细胞比例为2.11%。(4)盐霉素杀伤DU145干细胞作用机制:a、浓度处理组:在一定浓度范围内,盐霉素处理浓度增加,GSK3β磷酸化增强,β-catenin、c-Myc、CyclinD1、m-TOR、p70s6k、p-s6蛋白表达降低。b、时间处理组:在一定时间范围内,盐霉素处理时间增加,GSK3β磷酸化增强,β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、m-TOR、p70s6k、p-s6蛋白表达降低。结论:⑴盐霉素能够有效抑制前列腺癌DU145细胞体外克隆形成,并对其干细胞具有杀伤作用。⑵盐霉素可能通过抑制β-catenin及mTOR通路信号传导实现抑制肿瘤干细胞,GSK 3β可能是盐霉素杀伤肿瘤干细胞的作用靶点之一。