【摘 要】
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目的 表皮生长因子受体(EGFR)是CerbB1/EGFR基因编码的Src家族跨膜受体酪氨酸激酶,由胞外段,跨膜段及胞内激酶活性段构成。其胞外段的主要功能是结合表皮生长因子EGF等配体介
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目的 表皮生长因子受体(EGFR)是CerbB1/EGFR基因编码的Src家族跨膜受体酪氨酸激酶,由胞外段,跨膜段及胞内激酶活性段构成。其胞外段的主要功能是结合表皮生长因子EGF等配体介导受体同源二聚化,或者与同族其它的受体如erbB2等异二聚化,进而激活胞内段酪氨酸激酶活性,启动EGFR通路信号传递。目前EGFR胞外段已成为EGFR阳性表达的肿瘤免疫治疗的重要标靶。本实验通过分子克隆技术实现异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达,并通过基因工程纯化得到异种同源的重组EGFR蛋白疫苗,对家兔和荷瘤小鼠进行免疫,探讨以EGFR为靶向激发EGFR特异的抗肿瘤主动免疫反应的可行性。方法 将鼠和人的EGFR胞外段目的基因(mer,her)与分泌型毕赤酵母表达载体pPICZαA重组,构建了相应的重组表达质粒pPICZαA-mer和pPICZαA-her,用SacI将重组质粒线性化后,电穿孔转化酵母菌株GS115,利用Zeocin筛选阳性克隆,挑出阳性克隆用甲醇小规模诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及Western-blot检测,筛选高表达量的克隆作大规模诱导表达。分离纯化得到重组蛋白EGFR,并用SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定。在C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞hepa1-6,建立小鼠肝癌模型,用重组蛋白EGFR与复方氢氧化铝佐剂的混合物作为蛋白
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