本文通过试管法、平板法、Berthelot法和纸层析法检测β-丙氨酸（β-Ala）和L-天冬氨酸（L-Asp）含量,发现纸层析法相对其他三种方法具有较高的准确度,可以直观、较为快速地筛选出PanD高产株。建立了大肠杆菌panD易错PCR条件:Mn²⁺浓度1.0 mmol/L,dATP和dGTP浓度0.12 mmol/L,dCTP/dTTP浓度1.0 mmol/L。对构建的包含2000个克隆的panD易错PCR突变文库进行PanD活性的初筛和复筛,获得了48株PanD零产株和7株高产株,其中,高产株6-83和6-85的PanD活性比亲株A提高了3倍左右。将高产株进行panD序列测定和分析,发现突变株6-83和6-85均有2个碱基突变:114位碱基T→A和378位后插入碱基T。分别对亲株A panD的这两个位点进行定点突变,并对高产株6-85的panD进行定点回复突变,结果证明高产株6-85 PanD活性的提高是由114位碱基（T→A）突变引起的。研究发现,高产株和亲株A的质粒拷贝数差别不大,但高产株6-85 panD的总体转录水平明显高于亲株A;高产株在发酵6h时后菌体浓度明显高于亲株A;在发酵8h以后,高产株6-85的酶活明显高于亲株A。通过对24株零产株的panD序列测定、比对和分析,发现大多数零产株PanD的氨基酸酸碱性和亲疏水性都发生了改变。为了验证突变位点对PanD酶活的影响,选择了6株零产株进行定点回复突变,通过纸层析和HPLC对回复突变株进行PanD酶活检测,结果显示,PanD蛋白链Leu¹⁰→His¹⁰和Arg¹²→Leu¹²突变对PanD的影响不大,而Leu¹⁰→Pro¹⁰、Arg¹²→Leu¹²、His¹¹→Arg¹¹氨基酸变异均是其PanD酶活丧失的主要原因。Gly²⁴-Ser²⁵键是PanD自剪切的位点,零产株0-3和0-14的Ser²⁵→Pro²⁵和Gly²⁴→Ser²⁴突变很可能阻碍了PanD自剪切从而导致酶活的丧失。