目的：食物不耐受是一种复杂的变态反应性疾病,它的发生与许多慢性疾病密切相关。然而,临床现用食物不耐受特异性IgG检测试剂价格昂贵、方法不灵活,限制了食物不耐受检测项目的广泛开展和临床应用。本研究旨在研制一种个性化食物特异性IgG检测试剂盒,从而实现不同抗原的灵活选择和随机组合,将传统的“套餐式”检测模式,改进为个性化的“订单式”检测模式；调查本地区普通人群5种常见食物的不耐受情况,并分析其发病率与年龄、性别的关系；以特异性IgG抗体为识别“探针”,分析食物蛋白提取液中引起不耐受的蛋白组分,为食物不耐受患者进行更有针对性的脱敏治疗提供可靠依据。方法：1.个性化食物特异性IgG检测试剂盒的研制：以日常生活中常见的5种食物为例,制备食物的蛋白提取液,经SDS-PAGE分析其完整性；用长臂活化生物素标记食物蛋白,并用斑点印迹法检测其免疫活性,将其作为己知抗原备用；制备生物素化牛血清白蛋白-链霉亲和素酶标反应板,作为通用反应板；通过条件优化和最适稀释度的选择,确定反应的最佳条件；对所建立的方法进行方法学评价和相关性分析。2.本地区5种食物不耐受情况调查及不耐受组分分析：收集体检人群的静脉血,按受试者年龄,将其分为青年组(≤30岁)、中年组(31岁～49岁)和老年组(≥50岁)三个组别。用本实验建立的方法分析该人群对这5种食物的不耐受情况。用统计学软件SPSS19.0,对所得数据进行分析,研究本地区食物不耐受与年龄和性别的关系。每种食物蛋白经电泳、转印后,用筛选出的阴性和阳性单例血清分别做酶免疫印迹实验,通过所得的抗体谱分析食物中的不耐受组分。结果：1.个性化食物特异性IgG检测试剂盒的研制：5种食物蛋白经SDS-PAGE鉴定蛋白成分完整,符合实验要求；斑点免疫印迹显示,生物素化的食物蛋白具有良好的免疫原性,可用于酶联免疫吸附试验中；制备的通用酶标反应板可用于检测不同的食物特异性IgG。优化反应条件,建立个性化食物特异性IgG检测方法。最后,方法学评价结果表明,该方法的批内和批间变异系数均小于10%,食物间交叉反应率均小于15%,标准曲线稳定性较好,与临床常用商品化试剂盒具有良好的相关性,r=0.961。2.本地区5种食物不耐受情况调查及不耐受组分分析：本地区普通人群5种食物特异性IgG抗体总阳性率为81.07%,按阳性率高低依次排序为鸡蛋、牛奶、带鱼、蟹、虾,其阳性率分别是58.82%、51.92%、36.38%、34.27%、25.06%。经统计学软件分析,证明食物不耐受与年龄和性别存在相关关系。相对于成年人,老年人和儿童更易患病。女性特异性IgG抗体阳性率(45.14%)高于男性(30.87%)。5种食物的不耐受组分反应情况不同。蛋清中4种主要蛋白均参与食物不耐受的反应,不同个体间反应情况基本相似；而牛奶、虾、蟹和带鱼的蛋白成分较多,不耐受组分种类比较复杂,个体间的不耐受组分存在异质性。结论：1.利用生物素-亲和素系统制备的通用酶标反应板,可实现抗原包被过程与反应过程的统一。并且此方法可根据待检患者具体情况随机进行过敏原组合,实现个性化检测。方法学性能评价和相关性分析显示,此方法符合临床要求,可进一步制备新型的个性化检测试剂盒。2.本地区体检人群中普遍存在食物不耐受,食物不耐受与年龄和性别存在密切联系。相对于成人,老人和儿童更易患病,女性比男性的患病率高。不同食物的不耐受组分不同,食物的蛋白成分越复杂,其所针对的IgG抗体种类越多,越易产生异质性。