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研究背景及目的：动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是心脑血管疾病发生的重要病理基础。P-选择素糖蛋白配体-1（P-selectin glycoprotein ligand-1，PSGL-1）广泛存在于单核细胞、中性粒细胞和淋巴细胞表面。PSGL-1可与激活的血小板或内皮表面的P-/E-选择素结合，导致粒细胞在血小板或内皮表面的黏附，进而激活粒细胞，诱发血管壁的炎症反应。金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like protein-5, SSL5)可与粒细胞表面的PSGL-1结合，抑制粒细胞在激活内皮细胞表面的黏附；并可通过与粒细胞表面G蛋白偶联受体（GPCRs）结合，抑制细胞因子（CCL2/MCP-1、CXCL8/IL-8）和过敏毒素（C3a、C5a）对粒细胞的激活作用。本课题组在前期研究中，SSL5作为引导兼功能分子，与具有抑制凝血因子Xa（FXa）活性的分子—蜱抗凝血肽(tick anticoagulant peptide, TAP)进行联合，构建了具有抗炎和抗凝双效功能的融合蛋白TAP-SSL5。并且体外研究显示，TAP-SSL5可抑制粒细胞在P-选择素表面的黏附，还可直接抑制FXa的活性。本研究通过探讨融合蛋白TAP-SSL5对“血小板-粒细胞”聚集体的形成，血小板诱导THP-1细胞IL-8蛋白的表达以及MCP-1诱导THP-1细胞迁移的影响，以进一步探讨TAP-SSL5发挥抗炎作用的可能机制。研究方法：1.采用CCK-8试剂盒检测TAP-SSL5对细胞活力的影响。流式细胞仪检测THP-1细胞表面CD162（PSGL-1）的表达，及TAP-SSL5对小鼠抗人CD162单抗KPL-1与THP-1细胞结合的抑制作用。取健康成人富含血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）（取自西南医院输血科），以CGS缓冲液离心洗涤血小板；TAP-SSL5预处理THP-1或人中性粒细胞与20μmol/L ADP激活的血小板按1:50数量比共孵育5min后，以anti-CD62P单抗标记血小板表面的P-选择素；采用流式细胞仪检测血小板与THP-1或人中性粒细胞的结合情况；并进一步采用瑞氏-姬姆萨染色检测血小板与人中性粒细胞的结合情况以及TAP-SSL5的干预作用。2. TAP-SSL5预处理的THP-1细胞与20mg/L TRAP-6(凝血酶受体激活肽6)激活的血小板1:100数量比共孵育18h；ELISA试剂盒检测上清中IL-8蛋白表达情况。采用Transwell小室检测TAP-SSL5对MCP-1诱导THP-1细胞迁移的影响。结果：1. TAP-SSL5浓度在30mg/L或以下时对THP-1细胞或中性粒细胞的活力无明显影响。流式细胞仪检测显示，THP-1细胞表面有丰富的PSGL-1表达，KPL-1的结合阳性率为90%；TAP-SSL5（终浓度10mg/L）能显著抑制KPL-1与THP-1细胞的结合。20μmol/L ADP激活的血小板与THP-1或中性粒细胞的结合率分别为（31.3±8.4）%和（35.6±5.9）%；细胞经10mg/L TAP-SSL5预先处理后，其结合率分别降至（13.4±6.7）%和（10.4±6.4）%（p<0.01）。瑞氏-姬姆萨染色的结果显示：每100个中性粒细胞所结合的血小板数量为(364.3±79.1)个；细胞经终浓度为10mg/L TAP-SSL5预先处理中性粒细胞后，细胞所结合的血小板数量减少至(189.3±53.9)个；TAP-SSL5可抑制激活血小板与中性粒细胞的结合（p<0.05）。2. ELISA检测结果显示：THP-1+PLT组（阳性对照组）和TAP-SSL5干预组上清中IL-8蛋白浓度分别为(1068.3±410.7) pg/mL和(737.2±167.4) pg/mL；TAP-SSL5可显著抑制血小板诱导THP-1细胞IL-8蛋白的表达（p<0.05）。细胞迁移实验结果显示：按迁移细胞数相对于阴性对照组的倍数计算，MCP-1组（阳性对照组）、TAP-SSL5组和SSL5组分别为（14.1±1.9）倍、（6.2±0.2）倍和（6.1±0.7）倍； TAP-SSL5和SSL5均可显著抑制MCP-1诱导的THP-1细胞迁移（与MCP-1组比较，p<0.001）。结论：TAP-SSL5不仅通过抑制“血小板-粒细胞”聚集体的形成，以及激活血小板诱导的IL-8蛋白的表达，还可通过抑制MCP-1诱导的THP-1细胞迁移而发挥其抗炎作用。