Rituximab是人鼠嵌合的抗CD20单克隆抗体,在治疗非霍奇金淋巴瘤和类风湿性关节炎与系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病具有良好的效果。为获得临床上免疫反应较为平和,且在血液循环中半衰期较长的抗体,本研究用基因工程方法改造抗体IgG,形成缺失IgGCL、CH1和CH2的微抗体(minibody)形式。根据人源化抗CD20抗体RituximabcDNA序列,人工合成其抗体的轻链全长cDNA和重链全长cDNA。以轻链全长cDNA为模板扩增VL,以重链全长cDNA为模板分别扩增VH和CH3,再以VL、VH和CH3为模板,overlapPCR扩增获得minibody微抗体cDNA。　　 将minibody的cDNA构建到pUC19中,测序正确后,分别构建了minibody的酵母表达系统和大肠杆菌表达系统。作为对照也构建了Rituximab轻链和重链的真核表达系统和原核表达系统。　　 在酵母表达系统pESP-2和pESP-3中诱导表达minibody、Rituximab轻链和重链,SDS-PAGE电泳后,直接用考马斯亮蓝R250染色,均没有检测到特异性蛋白的表达。在原核表达系统pHsh中,42℃热激诱导6h和8h,SDS-PAGE电泳后,直接用考马斯亮蓝R250染色。在超声破碎液离心后的上清中没有检测到可溶形式表达的微抗体,在超声破碎后的沉淀重悬液中检测到以包涵体形式表达的minibody。在原核表达系统pET28a(+)中,用梯度IPTG浓度诱导6h后,SDS-PAGE电泳后,直接用考马斯亮蓝R250染色。在超声破碎离心后的上清液和沉淀中均检测到以可溶形式和包涵体形式表达的mini‘body,在超声破碎离心后的上清液中均没有检测到以可溶形式表达的抗CD20抗体轻链和重链蛋白,在超声破碎离心后的沉淀重悬液中均检测到以包涵体形式表达的抗CD20抗体轻重链蛋白。　　 直接用HRP标记的兔抗人IgG孵育转膜后的PVDF膜,用TMB显色,Westernblotting检测到以可溶形式和包涵体形式表达的minibody具有抗原性,以包涵体形式表达的抗CD20抗体轻链和重链蛋白也具有抗原性。　　 大量诱导抗CD20抗体轻链和重链蛋白表达,纯化包涵体,将抗体轻链和重链蛋白按等物质量混合复性,用HRP标记的兔抗人IgG直接孵育PVDF膜,在抗体复性液中没有检测到复性的抗体。　　 大量诱导minibody表达,用His纯化柱纯化到可溶蛋白。并以纯化的minibody为一抗,HRP标记的兔抗人IgG为二抗,Westernblotting检测到CD20阳性细胞Raji细胞中特异性CD20条带。