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创新药物去甲泽拉木醛(Demethylzeylasteral)是由复旦大学附属中山医院药剂科从雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. F)根皮中提取出的一种三萜类单体,具有免疫抑制、抗炎活性,抗肿瘤作用、抗生育作用。拟按照国家食品药品监督管理局有关一类新药的要求申报新药。本文在《中国药典》和国家有关药品质量研究的技术规定的指导下,对创新药物去甲泽拉木醛的质量标准和稳定性进行了系统的研究,初步建立了去甲泽拉木醛的质量标准(草案)。本论文对涉及到的样品通过元素分析、紫外光谱、红外光谱、核磁共振(13C、1H)和质谱等手段进行了结构确证,确证结构正确,为质量标准和稳定性研究提供了可靠的原料。本论文共分为二篇,其中第一篇为创新药物去甲泽拉木醛质量控制及稳定性研究,第二篇为2-氰基-6-氨基苯并氮唑柱前衍生化法测定血浆中半胱氨酸、同型半胱氨酸及半胱氨酰甘氨酸的含量。第一篇创新药物去甲泽拉木醛质量控制及稳定性研究1、去甲泽拉木醛质量控制研究本部分论文依据《中国药典》和有关新药质量标准研究的技术规范对去甲泽拉木醛进行质量控制研究。考察了性状、鉴别等项目,对有关物质、有机溶剂残留量检测及含量测定方法进行了研究,建立了用化学法、紫外分光光度法、红外光谱法鉴别去甲泽拉木醛的方法,建立了去甲泽拉木醛中甲醇、丙酮、正己烷和乙酸乙酯4种残留有机溶剂的测定方法；确定了高效液相色谱法测定去甲泽拉木醛中有关物质的检查方法；建立了紫外分光光度法和HPLC法测定药物含量的方法。2、去甲泽拉木醛稳定性研究本部分论文根据药物稳定性试验指导原则,对去甲泽拉木醛进行稳定性研究,包括影响因素试验、加速试验和长期试验。对稳定性样品的性状、主成分含量和有关物质进行分析。通过影响因素试验发现,去甲泽拉木醛对高温、高湿、强光条件均比较敏感,故不宜在高温、高湿、强光条件下保存。通过加速试验表明：样品在40℃,湿度75%条件下能稳定存在6个月。通过6个月长期试验表明：样品在25℃,湿度60%条件下较40℃,湿度75%条件下更稳定存在,目前长期试验仍在进行中。去甲泽拉木醛的有效期以长期试验结果为准,目前样品保存时间为6个月,已有0、3、6个月的数据。对长期试验的结果进行有效期统计学分析后,去甲泽拉木醛的主成分含量达到98.5%时有效期可以暂定为18个月,具体的有效期以长期试验测定结果为准。根据稳定研究结果,去甲泽拉木醛建议避光阴凉处贮存。3、去甲泽拉木醛质量标准草案及起草说明根据前两章的研究内容,起草并制定去甲泽拉木醛质量标准草案及起草说明,为去甲泽拉木醛的质量控制提供规范和依据。第二篇2-氰基-6-氨基苯并氮唑柱前衍生化法测定血浆中半胱氨酸、高半胱氨酸及半胱氨酰甘氨酸的含量本篇报道了一种新型的柱前衍生化试剂2-氰基-6-氨基苯并氮唑(CBT),发展了一种简单、灵敏、温和的高效液相色谱-荧光分析法(HPLC-FL)测定人血浆中半胱氨酸(Cys)、高半胱氨酸(Hey)与半胱氨酰甘氨酸(Cys-Gly)的含量,并对其荧光衍生条件及色谱条件进行了优化选择。在pH=8的磷酸盐缓冲液中,CBT与氨基酸的巯基和伯胺反应形成环状结构,实现了高效的柱前衍生化反应；随后采用0.1%TFA:MeOH:ACN=65:30:5(v/v/v)流动相在C18柱上分离,荧光(λex=350nm, λem=510nm)实现对人血浆中Cys、Hcy与Cys-Gly的共同检测。Cys、Hcy与Cys-Gly三种氨基酸的线性范围和标准曲线分别为8-20000nM(Y=1814.7X+16124, R2=1)、0.05-50μM (Y=614676X-236452, R2=0.9986)与2-4000nM(Y=9769.5X-193114, R2=0.9992),最低检测限分别为2、10及0.8nM。该衍生试剂只能与同时含有巯基与伯胺的氨基酸发生反应,所以CBT衍生化反应具有专属性强的特点,其它物质如谷胱甘肽及金属离子对上述氨基酸的检测无干扰。综合而言该方法衍生化条件温和,耗时短,操作简单、环保,是一种有效的同时测定人血浆中多种氨基酸的方法。