塔河废弃古河道胡杨内生酵母菌的多样性分析及两个新种的分类学鉴定

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1、本研究对新疆尉犁县卡尔曲尕乡南部以及西南部(Kiyik河和Ugan河废弃古河道)天然胡杨林胡杨可培养内生酵母菌的多样性进行研究,采用富集培养法结合划线分离技术得到可培养内生酵母菌30株。结合酵母传统形态学观察及生理生化,核糖体rDNA D1/D2区序列分析和系统发育分析结果显示,30株菌分别属于2个门:担子菌门(Basidomycota)、子囊菌门(Ascomycota);其中24株分离菌株属于担子菌门,占80%,包括隐球酵母属(Cryptococcus)、线黑粉酵母属(Filobasidium)、红酵母属(Rhodotorula)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)、毛孢子菌属(Trichosporon);6株属于子囊菌门,占20%,包括出芽短梗霉属(Aureobasidium)、假丝酵母属(Candida)。胡杨内生酵母菌中优势类群为隐球酵母属(15株)占50%,其次为出芽短梗霉属(5株)和掷孢酵母属(4株)分别占总分离菌株的16.7%和13.3%。其中,菌株P-10与ZA-3是隐球酵母属的两个潜在新种,它们与其系统进化地位最接近的模式菌株Cryptococcus aff.laurenti(iAY953961)和Cryptococcus laurentii(GQ352524)之间的26S rDNA D1/D2区序列相似性分别为95%,98%;ZA-8T是掷孢酵母属的潜在的新种,与其系统进化地位最接近的已知菌种Sporobolomyces nylandii (AB279629)之间的26SrDNA D1/D2区序列相似性为98%。本研究获得的胡杨可培养内生酵母菌显示出一定的多样性,蕴藏着开发利用价值的潜在新菌种资源。2、对分离到的潜在新种ZA-8T进行表型特征,生理生化特征及遗传型特征检测。结果:菌株ZA-8T菌落颜色为淡红色,细胞为卵圆形,无性生殖方式为出芽生殖,无子囊孢子。能生长在含0.01%的放线菌同培养基中。可利用的碳氮源有: L-苹果酸,磺琥珀酸, L-谷氨酸,α-酮戊二酸, D-葡萄酸,糊精,D-阿拉伯糖,D-纤维二塘,,龙胆二糖,α-D-葡萄糖,麦芽糖,D-甘露醇,D-木糖,β-甲基-D-葡萄糖苷,蔗糖,D-海藻糖,松二糖,熊果苷, D-核糖,水杨苷等。26S rDNA D1/D2区序列分析、系统发育分析结果表明,菌株ZA-8T归类于Sporobolomyces属,与其系统进化地位最接近的已知菌种Sporobolomycesnylandii (AB279629)之间的26S rDNA D1/D2区序列相似性为98%。基于表型特征、生理生化和遗传学上存在的差异,将菌株ZA-8T鉴定为是Sporobolomyces属的新种,命名为Sporobolomyces tograknsis。在基因库中ZA-8T核糖体大亚基26S rDNA D1/D2区序列注册号为HQ234294。3、对分离到的潜在新种KTH-63T进行多相分类学的鉴定。结果:菌株KTH-63T菌落颜色为米黄色,细胞为卵形,无芽孢,革兰氏阳性,无鞭毛,无运动性菌。菌株生长温度是10-40℃(最适30-37℃),pH范围是5.5-9.0(最适pH6.5-7.5),NaCl浓度范围是0-20%(w/v)(最适是0-3%)。具有氧化酶和过氧化氢酶活性,能利用碳源D-葡萄糖、D-棉子糖、D-蔗糖、D-麦芽糖和D-果糖。16SrRNA序列分析显示,菌株KTH-63T归类于葡萄球菌科(Staphylococcaceae),与其亲缘关系最近的模式菌株为Macrococcus brunensis CCM4811T,其序列同源性仅92.49%,基因组DNA的(G+C)mol%含量是34.1%。菌株KTH-63T主要包含的脂肪酸类型是anteiso-C15:0,iso-C16:0和iso-C14:0,分别占全细胞脂肪酸成分的41.06%,14.59%和8.07%,主要的醌型是MK-6。基于表型特征和系统发育分析,将菌株KTH-63T鉴定为是Staphylococcaceae科的新属新种,命名为Tarimoccocus tograknsis。菌株保藏编号是CCTCCAB2011010T和NRRLB-59557T
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