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第一部分：雌孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型 目的:建立大鼠子宫肌瘤模型。 方法:选取60只6～7周龄,体重200±20g的未孕雌性SD大鼠,随机分为3组,空白对照组、赋形剂对照组和模型组,采用雌孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,模型组大鼠每日肌注黄体酮注射液0.1ml(0.1mg)、己烯雌酚注射液0.1ml(0.04mg),赋形剂对照组注射0.2ml的灭菌花生油,股内侧肌肌注,双腿交替注射,空白对照组不做任何处理,共8周。最后一次给药后24h内处死大鼠,每组取10只,通过观察大鼠子宫的大体形态和镜下结构评价大鼠子宫肌瘤模型。 结果:①建模后大鼠平均体重(239.8±6.7g)明显低于赋形剂对照组(276.67±8.76g)和空白对照组(278.33±10.41g)大鼠(P<0.01)。②模型组大鼠子宫系数为(3.98±0.59mg/g)显著高于空白对照组(2.04±0.15mg/g)和赋形剂对照组(1.94±0.21mg/g)(P<0.01)。③空白对照组和赋形剂对照组的大鼠宫角最大横径分别为2.35±0.3mm和2.52±0.32mm,模型组大鼠宫角最大横径为4.36±0.66mm,与两个对照组相比有显著性差异(P<0.01)。④HE染色结果:模型组(2998.2±582.1)pixel大鼠子宫肌层较空白对照组(1689.8±85.9)pixel和赋形剂对照组(1797.2±258.53)pixel肌层增厚(P<0.01),肌细胞增多(72.1±7.43),高于空白对照组(47.2±4.69)和赋形剂对照组(45.9±4.77)(P<0.01),部分细胞增大,排列无序,细胞核形态不一,呈短梭形或卵圆形,胞核染色较深,嗜酸性粒细胞增多,肌层内小血管增多,呈明显的增生活跃状态。 结论:大鼠子宫肌瘤模型建立成功。 第二部分：Asoprisnil治疗大鼠子宫肌瘤的效果研究 目的:观察Asoprisnil对大鼠子宫肌瘤的治疗效果及对大鼠动情周期的影响。 方法:①取20只体重相同的子宫肌瘤模型大鼠,随机分为四组:对照组、Asoprisnil低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组5只,分别用1％CMCNa溶液、低、中、高剂量的Asoprisnil给大鼠灌胃,每日一次,共6周,最后一次给药后24h内处死大鼠,通过观察大鼠子宫的大体形态和镜下结构评价Asoprisnil对大鼠子宫肌瘤的影响。②给药期间通过阴道涂片观察大鼠的动情周期,5天一个周期,每隔5天重复一次。 结果:①与对照组相比,Asoprisnil给药组大鼠子宫逐渐变细且均匀,子宫供血减少。②子宫系数在对照组、低、中、高剂量组为:2.8±0.58mg/g,2.7±0.91mg/g,2.2±0.28mg/g和2.1±0.91mg/g,呈递减趋势,但差异尚无统计学意义(P>0.05)。③低剂量组大鼠宫角最大横径(3.82±0.79mm)与对照组(4.7±0.8mm)比较差异具有统计学意义(P<0.05),中、高剂量组的宫角最大横径分别为2.48±0.47mm、2.24±0.31mm,显著低于对照组(P<0.01)。④HE染色可见对照组大鼠子宫肌层局部增厚,肌细胞增多,细胞排列不规则,细胞核呈短梭形或卵圆形,胞核染色较深,肌层内小血管增多,与子宫肌瘤模型大鼠子宫组织变化一致;与对照组比较,低、中、高剂量组的大鼠子宫肌层逐渐变薄,肌细胞减小,细胞排列逐渐规则,细胞核呈长梭形,肌层内小血管减少。⑤在Asoprisnil给药期间,大鼠保持正常的动情周期,与对照组相比无明显差异。 结论:Asoprisnil能有效地治疗大鼠子宫肌瘤,且治疗效果随着给药剂量的增加而明显增强。此外,Asoprisnil给药治疗期间,对大鼠的动情周期无明显影响,提示本实验剂量的Asoprisnil对大鼠生殖内分泌轴的功能无明显影响。 第三部分：Asoprisnil对大鼠子宫肌瘤抗增殖作用机制的研究 目的:通过检测增殖抗原PCNA和Ki-67在肌瘤大鼠子宫肌层中的阳性表达率和mRNA转录水平的表达,以及PCNA在蛋白质翻译水平的表达变化,探讨Asoprisnil治疗大鼠子宫肌瘤的机制。 方法:采用免疫组织化学S-P法、实时定量PCR以及Western blot技术观察PCNA和Ki-67在大鼠子宫肌层的分布表达和mRNA的表达,以及PCNA在蛋白质水平的表达变化。 结果:①PCNA增殖指数在对照组(0.8±0.08)、Asoprisnil低剂量组(0.77±0.12)、中剂量组(0.59±0.19)和高剂量组(0.48±0.18)逐渐降低,Ki-67增殖指数在对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组中的增殖指数分别为为0.76±0.07,0.69±0.11,0.46±0.2,0.33±0.08,两增殖抗原变化趋势一致,低剂量组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),中、高剂量组和对照组差异有统计学意义(P<0.01)。②在mRNA水平,PCNA在Asoprisnil高剂量组的mRNA相对表达量为0.24±0.09,与对照组(1.11±0.2)和低剂量组(0.85±0.05)比较差异具有统计学意义(P<0.05);Ki-67在高剂量组的mRNA相对表达量为0.03±0.01,与对照组(0.45±0.05)、低剂量组(0.4±0.02)和中剂量组(0.2±0.003)比较差异有统计学意义(P<0.05)。③PCNA在Asoprisnil高剂量组的蛋白灰密度值为6885.56±372.23,与对照组(23634.26±1012.72)和低剂量组(22880.66±2683.87)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论:Asoprisnil降低增值抗原PCNA在肌瘤大鼠子宫肌层的阳性表达率,且其mRNA和蛋白表达均明显降低;而增值抗原Ki-67在肌瘤大鼠子宫肌层的阳性表达和mRNA表达亦显示明显降低趋势,提示增殖抗原PCNA和Ki-67共同参与了Asoprisnil对大鼠子宫肌瘤抗增殖作用。