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猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,常常引起母猪不孕、流产、产死胎和木乃伊胎等。除此之外,该病毒还可引起新生仔猪死亡及仔猪的皮炎和腹泻等症状。PPV在世界范围内普遍存在和流行,可感染不同日龄猪群,其引起的疾病尤其是母猪繁殖障碍性疾病给世界养猪业造成了巨大的经济损失。本研究首先建立了临床病料中PPV的PCR检测方法,对临床送检的疑似PPV感染病料进行检测,然后将检测结果为阳性的病料开展病毒分离,并对获得的8株病毒分离毒株进行了生物学特性研究,在此基础上对分离株NS1和VP2基因进行测序,了解并分析PPV基因变异特点及其遗传演变规律。具体研究内容如下：1.猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用选取猪细小病毒NS1基因设计特异性引物,建立了猪细小病毒PCR检测方法,试验证明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测到最低含量为1.58pg的PPV基因组DNA。运用该方法对2010年6月份到2011年9月份之间兽医院收集的猪疑似PPV感染病料进行了检测,在312份病料中检出34份为阳性,检出率为10.9%。2.8株猪细小病毒的分离鉴定及生物学特性分析将PCR检测结果为阳性的病料开展病毒分离,共分离到8株PPV,在此基础上进行了分离毒株生物学特性的研究。HA试验结果表明8株病毒能在ST细胞中增值,血凝效价可达到28以上；PD50测定结果表明：PPV分离病毒JB, JZ, ZD, DS, ZM间的抗原性最相近,GX, SX, HL与其它分离毒株间抗原性差异较大。3.8株PPV分离病毒NS1基因和VP2基因序列的测定与分析完成8株PPV NS1基因和VP2基因的克隆、测序。同源性比对分析发现不同分离毒株之间的NS1和VP2基因相似性均在98.0%以上,表明PPV NS1和VP2基因均具有较高的保守性；多重序列比对发现PPV NS1基因和VP2基因存在多处位点突变,对这些位点所受选择压力进行分析,发现VP2基因中多个突变位点处于正向选择压力之下,可能对PPV适应生存环境的改变及其自身的进化具有重要意义。4.PPV遗传进化分析结合GenBank中收录的PPV基因序列,构建了NS1基因及VP2基因的系统发育树。结果显示：中国PPV分离株可分为四个亚群,本次试验分离到的病毒SX, JZ, JB, ZD, GX均属于亚群1,其中JB和ZD, SX和JZ进化关系较近, GX与其它4株病毒进化关系较远；分离株DS和ZM属于亚群2,二者进化关系最近；分离株HL属于亚群4,与德国分离株亲缘关系较近,可能代表了中国新发现的基因亚型。