目的： 1．观察细胞周期蛋白（cyclin）D1和细胞周期蛋白依赖蛋白激酶（cdk4） 蛋白在缺血后神经细胞的表达及与神经细胞凋亡的关系，以及丹参和 Flavopiridol对其的影响，观察Flavopiridol的剂量和作用的关系。 2．观察 CyClin D1 mRNA在缺血后神经细胞的表达及丹参的影响。 3．观察 cyclin G1在神经细胞缺血后的表达变化与缺血神经细胞凋亡的关 系，并观察丹参对其的影响。 方法： 1．二级健康雄性体重180-220g的Spfague-Dawley大鼠 315只，随机分为对 照组（假手术组）、缺血组（单纯缺血组）、丹参组（缺血+丹参组）、FH 组（缺血+高剂量 Flavopiridol组）和FL组（缺血+低剂量 Flavopiridol组）， 并设空白对照组。按不同的组别需要在大鼠缺血后30min、1h、3h、6h、 12h、24h、48h、72h和7d等时间点取脑液氮保存。 2．采用线栓法大鼠大脑中动脉持续缺血模型。丹参组用药：缺血前30min 和缺血后 24h、48h腹腔注射丹参，用量为 10g/kg体重；Flavopiridol用 药：缺血前30min和缺血后24h、48h侧脑室缓慢给药，FH组用量为2 ×10^-4mmol/kg体重；FL组用量为 1×10^-4mmol/kg体重。 3．应用兔疫组化和 TUNEL凋亡染色方法，通过相邻冰冻切片观察 cyclin DI、cvclin G1和 cdk4在缺血神经细胞的表达情况以及神经细胞凋亡情 况。 4．应用 RT-PCR技术，观察神经细胞缺血后 cyclin D1 mRNA表达情况。 结果： 1．cyclin D1和cdk4分别在缺血后6h和 12h开始表达，均在缺血后48h达 中文摘要 第3页共129页 高峰，以缺血半暗带为主要表达区域，核染为主。凋亡细胞在缺血后 12h 开始明显增加，缺血后 72h达高峰。与 cyclin DI和 cdk4表达区域基本 相同。丹参组 CyClin DI和 Gdk4蛋白异常表达明显减少的同时，神经细 胞凋亡也明显减少；FL组和 FH组的 CyClill及 Cdk4蛋白异常表达均 明显减少，FL组各干预点神经细胞凋亡均明显减少，FH组只有缺血24h 明显减少了神经细胞的凋亡。 2．缺血后6h开始出现cvclin DI mRNA水平增加，缺血后72h达高峰；丹 参组在除缺血后 6h外的各干预时间点均明显减低了 cyclin DI mRNA的 表达量。 3．缺血后 lh开始，cyClin GI蛋白表达开始增加，缺血后3h达到高峰，自 缺血后 12h开始缓慢下降，缺血后 72h基本恢复到空白对照组的水平。 丹参于预后，缺血后6h、12h和24h时间点可见Cyclin GI阳性细胞数量 增加，仅12h时间点的增加有统计学意义。 结论： L Cyclin DI和cdk4在缺血后神经细胞的异常表达可能是缺血神经细胞凋亡 的启动或者促进因子；丹参可能通过抑制了 CyClin DI和 Cdk4在缺血后 神经细胞的异常表达而减轻了缺血神经细胞的凋亡；Flavopiridol作为细 胞周期阻断剂，可以通过阻断 cyclin DI和 cdk4的异常表达，从而抑制 缺血神经细胞的凋亡，但Flavopiridol本身也可以引起正常的神经细胞凋 亡。 2．cyClin GI在神经细胞缺血后表达增加，可能与神经细胞凋亡无关，而与 神经细胞缺血自我保护适应性和损伤修复有关。丹参可以通过增加 cyclin GI的表达，而发挥其对神经细胞的保护作用。