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背景与目的:Oct4,即octamer binding factor4,是POU（Pit-Oct-Unc）转录因子家族中的一员,该家族能够与某些基因顺式反应元件中的Oct序列（ATGCAAAT）结合,激活或抑制转录,从而调节基因的表达,维持细胞的全能性。Oct4又被称为POU5F1,OTF3,Oct-3/4或Oct3,其基因位于人染色体6p21.3,含有324个氨基酸,分子量18-KD。近年的研究发现,Oct4几乎专一表达于ES细胞中。在胚胎发育的早期阶段,Oct4表达于所有的卵母细胞,随之表达于胚泡内细胞群（ICM）,而在滋养外胚层（TE）及原始内胚层中的表达减少。在成体中,Oct4的表达仅限于发育中的生殖细胞。定向去除Oct4的大鼠,其胚胎缺乏多能性的ICM,这说明Oct4在维持胚胎细胞的多能性上有着重要的作用。进一步研究发现高水平的Oct4表达可促使ES细胞向中胚层、内胚层细胞分化,低水平则向外胚层分化。具有正常水平Oct4的ES细胞仍可保持多能性。所以研究者认为Oct4是干细胞具有多潜能性的重要调控因子。对Oct4进行深入研究可能将有助于揭示干细胞多潜能性的分子和细胞机制。在一些肿瘤细胞系中也存在Oct4的表达,如肝癌细胞系Mahlava、宫颈癌细胞株（HeLa）、胰腺癌Capan-2细胞系和Pan-1细胞系、弱致瘤性和高致瘤性人乳腺上皮干细胞、人乳腺癌细胞系-7（MCF-7）等。在表型上,人类植入前胚胎细胞与肿瘤细胞具有相似性,尤其在不定向生长分化能力方面。两种细胞都需要经历重调而达到增殖状态,从而具有永生、自我更新和侵袭能力。这些相似性说明在肿瘤细胞中可能有一些胚胎基因的重新表达或激活。Oct4基因可能是一个特异的分化全能性基因标记,或者是分化全能性的必需基因,与肿瘤的发生有密切联系,表达Oct4的细胞可能是引起肿瘤发生过程的靶细胞。对Oct4加以认识可能发现一些新的恶性肿瘤的治疗方法。SSEA-1（stage specific embryonic antigen-1）阶段特异性胚胎抗原-1,又被称为Lewis x（Lex,CD15）,是一个具有Galβ（1-4）（半乳糖）Fucα（1-3）（岩藻糖）GlcNAcβ（1-3）（乙酰氨基半乳糖）结构的三糖。在哺乳动物胚胎发育的8细胞后期开始出现SSEA-1的表达,在桑椹胚中表达的量最高,随后表达于ICM及内胚层,着床后的滋养外胚层不再有SSEA-1的表达,而原始生殖细胞表面又再次出现SSEA-1。在成年小鼠的肾小管、精子、输卵管、子宫内膜、神经干细胞和小脑均有SSEA-1分布;在成年人体的神经细胞、神经胶质细胞、外周血白细胞和红细胞表面、胃上皮细胞均能检测到SSEA-1;在多种肿瘤如乳腺癌,结肠癌,霍奇金淋巴瘤和急性早幼粒细胞白血病中也能检测到SSEA-1。肿瘤细胞表面表达的SSEA-1和唾液酸化的SSEA-1已被作为肿瘤患者转移和预后的监测指标。已有的研究认为SSEA-1与受精、胚胎发生、神经发育过程中的细胞识别有关:SSEA-1介导动物胚胎桑椹胚时期细胞的识别与黏附;介导胚泡与子宫内膜细胞的识别,完成胚泡着床过程;还介导了动物上皮细胞间的识别、黏附与致密性组织结构的形成。另有研究证实人类精子表面的SSEA-1在精卵结合过程中发挥了一定的作用。Maria Teresa Elola等有一项关于MCF-7和人多形核中性粒细胞（PMN）与人脐血管内皮细胞（HUVEC）粘附的研究,其结果证实MCF-7癌细胞和PMN能够与HUVEC结合,且其结合过程与SSEA-1有关,他们的证据是这种粘附能够被抗SSEA-1单抗MCS-1阻滞。该结果显示SSEA-1是肿瘤细胞与血管内皮相互作用过程中一个必不可少的因子,这样就给我们提供了一个通过相应单抗进行抑制的靶位,也意味着防止肿瘤细胞的粘附和转移成为可能。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升。在欧美国家,乳腺癌占女性恶性肿瘤的25%～30%。20世纪末的统计资料表明全世界每年约有130万人被诊断为乳腺癌,而有40万人死于该病。在我国,乳腺癌在城市中的发病率为女性恶性肿瘤的第二位,一些大城市中已经上升至第一位,农村中为第五位。乳腺癌已经成为妇女健康的最大威胁。自20世纪90年代以来,随着早期诊断和综合治疗的进步,特别是术后辅助治疗的进步,北美和英国等国家的乳腺癌死亡率有所下降。但由于肿瘤病因、发生发展以及生物学行为的复杂和不均一性,临床肿瘤的异质性等因素,恶性肿瘤的治疗效果对每个患者来说并不十分确切,乳腺癌也不例外,因此,在遵循综合治疗、个体化等原则的基础上,寻找与乳腺癌发生发展及预后相关的因素,探寻乳腺癌治疗的新靶点,新方法,是十分必要的。Oct4和SSEA-1在乳腺癌中的研究都处于初步阶段,在乳腺癌组织中是否存在确切表达?其有何意义?目前还都是空白。即使在细胞系中的研究也仅有个别报道。鉴于此,本课题研究目的包括1.探讨乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中是否存在Oct4和SSEA-1的表达;2.观察Oct4和SSEA-1在乳腺癌细胞系和乳腺癌组织中的表达情况及其意义。材料与方法:1.材料:组织标本与细胞系组织标本:取自郑州大学第一附属医院05～07年手术切除组织,包括93例乳腺浸润性导管癌组织（患者均为首次发病,女性,术前未接受化疗和放疗）;32例乳腺良性病变组织;2例精原细胞瘤组织。所有标本均经病理专家证实。细胞系:人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-468均由河南省肿瘤病理重点实验室惠赠。细胞分别复苏后置于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的DMEM高糖培养液中,于饱和湿度、37℃,5%CO2培养箱中培养使其贴壁生长。0.25%胰酶消化传代,实验均选用对数生长期细胞。2.组织标本切片后采用免疫组织化学PV两步法检测Oct4的表达情况,SP法检测SSEA-1的表达情况。3.选对数生长期细胞消化离心,采用血浆和凝血酶包裹成细胞团块,常规固定、包埋、切片,检测方法同组织切片。4.评分方法:综合考虑切片中阳性细胞占所观察同类细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项指标,半定量判断结果。根据阳性细胞在所观察细胞中所占比例分为:阳性细胞数≤10%为1分;11%～50%为2分;51%～75%为3分;＞75%为4分。根据显色程度判断阳性强度:标本无着色为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分:棕褐色为3分。两者分数乘积0～2分为（-）;3～4分为（+）;6～8分为（++）;8分以上为（+++）。5.统计学处理:所有数据均采用统计软件SPSS13.0处理,统计方法采用X2检验。当P＜0.05时,认为有统计学差异。结果:1.组织切片1.1 Oct4在乳腺癌中的表达率为45.2%（42/93）,在乳腺良性病变中的表达率为3.1%（1/32）。与乳腺良性病变相比,乳腺癌中Oct4的表达率明显增高（P＜0.05）。Oct4在乳腺癌各分子亚型中的表达率为:Luminal A型34.5%,LuminalB型33.3%,HER2过表达型66.7%,Basal-like型88.2%。乳腺癌不同分子亚型中Oct4的表达率不同,其差异具有统计学意义。1.2 SSEA-1在乳腺癌及乳腺良性病变中的阳性率均＜5%。2.细胞切片2.1 Oct4在两种细胞系中的阳性率均＜1%。2.2 SSEA-1在两种细胞系中的阳性率均＞90%。结论:1.乳腺癌中存在Oct4的表达;乳腺癌中Oct4的表达率明显高于乳腺良性病变;乳腺癌中Oct4的表达率与分子亚型相关,其中Basal-like型表达率最高。2.乳腺癌及良性病变中SSEA-1表达率低,其临床病理相关性尚不明确。3.Oct4和SSEA-1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达均不一致,由细胞系中观察到的研究结果需谨慎看待,不能盲目推及实体组织。