龙花方总黄酮提取分离及不同配比的主要药效学比较研究

来源 :陕西中医学院 陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jk224wang1
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目的:对花生衣的质量标准进行初步研究;以总黄酮含量为指标对龙花方中仙鹤草、花生衣的提取工艺进行考察,优选提取工艺条件;以总黄酮含量为指标,对仙鹤草、花生衣中总黄酮进行纯化,优选纯化工艺条件;对提纯后的两种总黄酮进行组分配伍进而进行不同配比的药效学比较研究,在此基础上为该复方后续物质基础的研究及制剂开发提供系统、全面的数据及理论支撑。  方法:按《中国药典》2010年版一部附录IX H中水分测定法中的第一法,附录IX K灰分测定法和酸不溶性灰分测定法和附录X A浸出物测定法测定。采用单因素筛选结合响应面设计法试验,对影响总黄酮含量的提取次数、乙醇浓度、液料比与提取时间对龙花方中的仙鹤草与花生衣的提取工艺进行考察,确定出最佳的工艺参数;以总黄酮的吸附率和解吸率为指标,考察仙鹤草和花生衣中总黄酮的树脂的吸附及洗脱条件。腹腔注射环磷酰胺对小鼠造成血小板减少模型,采用针对小复方的基线等比设计法拟定两种总黄酮的配比处方。观察不同处方对模型小鼠外周血小板、红细胞、血红蛋白,脏器指数的影响。  结果:花生衣中水分不得超过9.6%,灰分不得超过2.5%,酸不溶性灰分不得超过0.27%,水浸出物不得超过11.9%,醇浸出物不得超过25.7%,薄层色谱法可用于鉴别花生衣,高效液相色谱法测定的儿茶素含量稳定。仙鹤草的最佳提取工艺为:提取溶剂为50%乙醇,液料比为20倍,提取时间为70min,提取3次,在提取工艺下,仙鹤草总黄酮平均提取率为9.5%。花生衣的最佳提取工艺为:提取溶剂为40%乙醇,液料比为15倍,提取时间为30min,提取3次。在此提取工艺下,花生衣总黄酮的平均提取率为27.21%。D-101型大孔树脂对仙鹤草和花生衣中总黄酮有较好的分离纯化作用。仙鹤草的最佳纯化工艺为径高比为1:10,上样药液浓度为0.15g·mL-1,上样药液流速为1BV/h,水洗4BV,洗脱溶剂为50%的乙醇,醇洗3BV,纯化后总黄酮纯度比纯化前提高了30%左右。花生衣的最佳纯化工艺为径高比为1:15,上样药液浓度为0.1g·mL-1,上样药液流速为2BV/h,水洗3BV,洗脱溶剂为70%的乙醇,醇洗3BV,纯化后总黄酮纯度比纯化前提高了30%左右。5个处方均能提高造模小鼠的血小板数,处方4作用较为明显(P<0.01),对白细胞数,红细胞数、胸腺指数脾脏指数及体重变化值也有一定的升高趋势。  结论:本实验初步对花生衣的质量标准进行了研究,为以后花生衣资源的合理利用奠定了基础;龙花方中的仙鹤草、花生衣中总黄酮的提取分离纯化工艺稳定,可行;优选出的处方能显著的提高造膜小鼠的血小板数。
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