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目前有多种疾病严重威胁着牛的健康,影响了我国养牛业的发展和牛肉和奶制品的对外贸易。因此,急需研制出安全、高效、新型的抗病毒和免疫增强剂用于增强牛的抵抗力。干扰素（Interferon,IFN）是动物机体感染病毒或接种疫苗后产生的一类具有抗病毒和免疫调节功能的蛋白质,是动物抵御病毒入侵的第一道防线。根据干扰素的氨基酸序列、抗原性和细胞来源的不同可将其分为2个型:Ⅰ型干扰素的主要成员为α干扰素和β干扰素,Ⅱ型干扰素为γ干扰素。Ⅰ型干扰素具有较强的抗病毒功能,Ⅱ型干扰素抗病毒功能稍弱,但免疫调节功能较强。人类重组干扰素用于治疗病毒感染和肿瘤疾病已有几十年的成功历史。近年来,牛干扰素（Bovine interferon,BoIFN）的抗病毒和疫苗佐剂功能也在更多的试验中被发现和证实。本研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组牛α、γ干扰素并研究其抗病毒作用,为我国重组牛干扰素的工程化生产及其在养牛业中的应用奠定基础。研究主要从以下几个方面展开: 1.应用RT-PCR方法从经刀豆素（ConA）刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞总RNA中克隆到牛γ干扰素成熟蛋白基因,与Genebank上登录的γ干扰素基因（NM174086）同源性为100%。然后将特异性片段连在PBV载体上进行表达,经SDS-PAGE分析,原核表达产物为16KDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。经7mol/L盐酸胍的变性液溶解及0.5mol/L盐酸胍复性液处理,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化,细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-γ具有较高的干扰素活性,约为6.0×105U/mg。 2.提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的pichia pastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果（20kDa）略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制