【摘 要】
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猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)感染可引起猪的以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床特征的急性传染病。VP1是EMCV的主要的结构蛋白，具有良好的抗原性，可刺
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猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)感染可引起猪的以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床特征的急性传染病。VP1是EMCV的主要的结构蛋白，具有良好的抗原性，可刺激机体产生中和抗体。
利用构建的基因工程重组菌BL21表达EMCVVP1蛋白，经SDS-PAGE分离目的蛋白并切胶纯化后作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠，3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得的杂交瘤细胞经间接ELISA和间接免疫荧光筛选，对分泌抗体阳性孔采用有限稀释法进行亚克隆3次，获得了2株稳定分泌抗EMCV VP1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为10B和11D。经间接ELISA检测，2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1:1600和1:800，小鼠腹水效价分别为1:2.56×10<6>和1:1.28×10<6>。亚类鉴定结果显示，2株单克隆抗体均为IgG2a亚类，轻链均为κ型。Western-blot鉴定表明获得的2株单克隆抗体均能特异性识别重组VP1蛋白。间接免疫荧光和免疫组化证实2株单克隆抗体可特异性识别EMCV。单克隆抗体识别抗原位点分析结果表明，获得的2株单克隆抗体识别VP1蛋白的抗原表位不同。本研究为EMCV血清学诊断技术及VP1蛋白抗原表位分析奠定了物质基础。
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