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目的脓毒症(sepsis)易造成多器官功能障碍,其中心脏是容易受累的器官之一,且早期就可出现收缩和舒张功能下降。但脓毒症时心功能障碍的具体机制尚未明确,以往研究证实细胞因子在脓毒症心功能障碍的发生与发展中起重要作用,而在众多的炎症介质中,目前TNF-α被公认为炎症反应的主要细胞因子。以往研究也证实β3肾上腺素能受体(β3-AR)变化在心力衰竭的发生发展中起重要作用,但其与脓毒症心功能障碍的关系鲜有报道。本实验通过行盲肠结扎穿孔术(cecalligation and puncture,CLP)复制出大鼠脓毒症模型,动态观察在此期间心肌TNF-α和β3-AR的变化,探讨TNF-α和β3-AR在脓毒症心脏的表达变化和意义,为临床治疗脓毒症心功能障碍提供理论依据。方法1、模型建立和取材选用我院提供的雄性wistar大鼠200—220g为研究对象制备大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型。脓毒症组(CLP)分别于术后6、18、24、36小时取材,分离左心室,切取一部分固定后石蜡包埋,制备腊块及病理切片,剩余-80℃冷藏备用;封闭组(anti-TNFα-mAb):术前30分钟给予anti-TNFα-mAb 0.1mg/kg溶于0.9%氯化钠溶液0.1ml中腹腔注射,其余组注射等量0.9%氯化钠溶液。各组均采集腹主动脉血5ml,其中3ml注入灭菌试管做血培养,余下2ml在玻璃试管中静置5分钟后,4℃离心(3000r/min,10min)分离血清,分装后-20℃保存。2、血清及心肌组织TNFα的检测取-20℃冻存血清,样本复融后直接检测;取-80℃冻存心肌组织称重后加入三倍体积磷酸盐缓冲液(0.01M,PH7.2)用超声匀浆机制备成匀浆,离心(14000r/min,20min,4℃)取上清液检测。大鼠TNFαELISA检测试剂盒灵敏度为5pg/ml。严格按试剂盒说明进行。3、β3肾上腺素能受体的检测应用免疫组织化学方法检测β3肾上腺素能受体在脓毒症心脏中的表达及其分布情况;应用western-blot方法检测脓毒症心脏β3肾上腺素能受体蛋白表达的改变;运用RT-PCR方法检测脓毒症心脏β3肾上腺素能受体基因表达的改变。结果1、脓毒症大鼠心肌TNF-α水平与β3-AR之间存在正相关性(r=0.548,P＜0.001)。2、相同时间点脓毒症组和封闭组大鼠血清及心肌组织TNF-α均高于对照组(P＜0.01)且脓毒症组TNF-α水平均高于封闭组(P＜0.01)。3、相同时间点脓毒症组和封闭组大鼠心肌β3-AR蛋白的表达均高于对照组,且脓毒症组36h亚组表达最高,与对照组相比的百分比是(360.67±55.7%)。4、β3-AR与β-actin的mRNA比值,脓毒症组36h亚组表达最高,比对照组增加73%。5、免疫组化检测后我们观察到心肌细胞膜和细胞浆中均有β3-AR的表达,空间分布不均,没有特异性。结论1、脓毒症大鼠心脏β3受体的表达发生了改变,这种改变在心脏功能改变过程中可能有着重要作用。2、脓毒症时TNF-α可能通过上调β3-AR基因和蛋白的表达进而导致心功能障碍。