条斑紫菜光系统Ⅱ蛋白复合物的结构和功能在个体发育过程中的变化

来源 :中国科学院研究生院(海洋研究所) | 被引量 : 0次 | 上传用户:fanjun6699
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本论文选择条斑紫菜(Porphyra yezoensis)两个不同发育阶段(孢子体和配子体)作为研究对象,对其光合膜蛋白的结构和功能进行了初步比较研究。采用了三种不同的缓冲液分离类囊体膜:20mM Mes-Na(pH6.4),30mM 磷酸纳缓冲液(pH7.0),50mM Hepes缓冲液(pH7.8)。根据光系统活性的测定结果,筛选出了适宜分离条斑紫菜类囊体膜的缓冲溶液:30mM 磷酸纳缓冲液(pH7.0),分离得到了条斑紫菜不同发育阶段的有活性的类囊体膜。采用不同的去污剂增溶分离得到的类囊体膜,根据光系统活性的测定结果,筛选出了适宜增溶光系统膜蛋白的去污剂:LM。对于3%LM增溶后的类囊体膜蛋白,分别采用了蔗糖密度梯度离心,离子交换柱层析和分子筛层析等分离纯化方法。比较不同的分离纯化方法,最终采用蔗糖密度梯度离心结合Superdex 200 分子筛柱层析的方法首次纯化出了条斑紫菜不同发育阶段的PSII蛋白复合物。PSII放氧活性测定结果表明:纯化得到的孢子体PSII蛋白复合物的放氧速率为2216.4μmolO2/chl(mg).h,大于相应的纯化得到的配子体的PSII蛋白复合物的放氧活性:2161.6μmolO2/chl(mg).h。PSII蛋白复合物SDS-PAGE电泳结果表明:孢子体比配子体在分子量范围10KDa-25KDa内含有更多的多肽条带。PSII蛋白复合物电泳后部分蛋白条带的氨基酸序列测定结果表明孢子体的PSII蛋白复合物中含有PSII反应中心叶绿素P680的脱辅基蛋白CP-47、PSII反应中心叶绿素P680的脱辅基蛋白CP-43,以及PSII的反应中心蛋白D2;配子体的PSII蛋白复合物中含有PSII反应中心叶绿素P680的脱辅基蛋白CP-47和PSII反应中心蛋白D1。
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