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肿瘤血管形成与恶性肿瘤的发生、发展和转移密切相关。以血管为靶点、抑制血管形成,从而抑制肿瘤增殖和转移已经成为一种重要的肿瘤治疗途径。本研究选取了与肿瘤血管形成密切相关的VEGF-E、VEGF-R2和整合素αVβ3作为直接靶标,设计并合成了针对以上三种靶点的异种化的靶抗原,每个异种化的靶抗原中至少含有两种物种的同源基因片段,物种涉及小鼠、口疮病毒、鹌鹑、人类和非洲爪蟾;然后将上述三种异种化的靶抗原融合形成抗血管形成的多靶点复合抗原——ERV融合抗原。 利用上述抗原构建DNA疫苗,在小鼠模型中初步评价了各疫苗间抑瘤活性的差异。证实上述三种异种化靶抗原及多靶点ERV复合抗原DNA疫苗,均能够在小鼠体内诱导良好的体液免疫应答,产生抗原特异性抗体,抗体效价最高可以达到1:10000;同时也诱导产生了特异性的细胞免疫应答,CD4+细胞/CD8+细胞比值上升,分泌IFN-γ和IL-4的T细胞数量显著增加。免疫小鼠皮下移植瘤实验证实,上述三种异种化抗原及多靶点ERV复合抗原DNA疫苗均能够有效延长小鼠成瘤时间、抑制肿瘤的生长并使小鼠的存活率大大提高;其中多靶点复合抗原ERV组的小鼠成瘤时间延长至19天左右(PBS和空载体对照组的成瘤时间为8~9天),小鼠的存活率提高到83%(PBS和空载体对照组为33%),肿瘤抑制率达95.36%(PBS和空载体对照组瘤重达5.09±0.33g和5.93±0.96g,而多靶点复合抗原ERV组瘤重仅为0.20±0.16g)。 本研究同时从RCC细胞系中克隆出肾癌特异性抗原G250-MN/CA Ⅸ并成功构建了含有该抗原的DNA疫苗,为进一步开展联合应用肿瘤特异性靶抗原疫苗和抗血管生成靶抗原疫苗进行协同免疫治疗奠定了基础。