本研究利用三种不同的方法提取猪伪狂犬病毒冀A株的核酸,并根据文献,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增出了PRV冀A株的gD基因。经琼脂糖电泳检测,纯化目的片段与pUC18克隆载体连接,并转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选,得到转化子经PCR鉴定和酶切分析筛选出阳性克隆。结果表明,作者得到的阳性重组子(pUC1.2)中含有gD基因,表明是正确插入,并把阳性克隆质粒送大连宝生物公司测序。经核苷酸测序,该基因全长1197bp,含有一个开放阅读框,编码398个氨基酸,与国内外5株不同来源的毒株进行了比较,发现冀A株gD基因存在13处点突变和一处缺失突变,并发现PRV gD在816nt-831nt处有一处C(A)GGCCC重复高变区,对应于gD268位-275位Arg-Pro重复高变区。使用DNA star软件将冀A株gD基因核苷酸序列与上述毒株-YangSan、Ea、Fa、Ka、闽A(Min-A)株的gD基因序列进行比较,其同源性在98.8%～99.7%之间。将冀A株gD基因推导的氨基酸序列与上述5个毒株PRV gD基因氨基酸序列进行比较,同源性在77.9%～79.2%之间。可见不同来源的PRV毒株gD基因在核苷酸水平上的同源性较高,但在氨基酸水平的同源性则具有一定差异。并绘制了系统发育树,根据系统发育树分析,冀A株与闽A(Min-A)株表现出了明显的亲缘关系。 作者将正确的重组克隆质粒pUC1.2用EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切,电泳回收目的片段,将目的片段插入经EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切处理的pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌JM109感受态细胞中,得到的转化子经酶切分析,筛选出符合阅读框的重组子,构建出重组表达质粒pGgD,并在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中成功地表达了含目的蛋白的融合蛋白,融合蛋白的分子量约为53KD,加入IPTG(1mmol/L)诱导6h后,蛋白表达达到最高水平。经Western-blotting杂交实验,目的蛋白与兔抗PRV冀A株抗体反应,表明表达产物为PRV冀A株gD蛋白,且具有一定的反应原性,为制备单特异性抗体奠定了基础。