桑树为多年生木本植物,属于蔷薇目(Rosales)桑科(Moraceae)桑属(Morus L.)桑种(Morus alba L.),是一种重要的药用植物资源,最早见于东汉的《神农本草经》。桑叶、桑椹、桑枝、桑白皮都含有特殊的物质和功能性成分,均可入药,具有独特的药用价值。生物碱是一类存在于生物体中的含氮碱性有机化合物,具有特殊的生理作用和药效。桑树中有活性的生物碱是一类以1-脱氧野尻霉素为主的多羟基哌啶类生物碱。该类生物碱与单糖的结构相似,也被称作含氮糖。桑树生物碱的药理研究主要集中在降血糖上,不同种质资源的桑树生物碱含量有所差异,这也导致了其药用价值的差异。考察不同种质资源中生物碱的含量差异,以期筛选出可用于药用的优良桑树资源,同时为药食用途桑树品种的选育提供科学依据。1、建立桑叶总生物碱和DNJ的检测方法建立了雷氏盐比色法测定桑叶总生物碱含量,方法具体为:前处理过的桑叶总生物碱溶液2m L,加入质量分数为2%的雷氏盐溶液3m L,冰浴2h,抽滤,以冰浴后的乙酸乙酯冲洗滤纸至滤纸颜色不再变化,取出烘干,放入50m L离心管,加70%丙酮溶液溶解,弃去滤纸,溶解液在523nm测定吸光值,根据标准曲线,以DNJ的摩尔质量计算桑叶总生物碱含量。通过方法学验证,该方法具有良好的精密度、重复性和稳定性,能够满足分析要求。桑叶生物碱提取液中含有色素、黄酮、蛋白质等杂质,在采用雷氏盐法测定前应去除这些干扰物质。本研究采用活性碳脱色除杂,通过多次试验确定了活性碳用量及振荡时间:活性碳与样品质量比为1:2,振荡摇匀1h,所得桑叶提取物澄清,脱色除杂效果良好。超高效液相色谱紫外检测法检测桑叶中DNJ的含量。色谱条件为色谱柱:CORTECSTM C18(2.1 mm×100 mm,2.7μm);紫外检测器检测波长254 nm;流动相:乙腈-0.5%醋酸(28:72,V/V);流速:0.6 m L/min;柱温28℃;进样量1μL。本方法流速低,能够减少有机溶剂的消耗,进样量少,节省样品。通过方法学验证,该方法具有良好的精密度、重复性和稳定性,能够满足分析要求。2、探索桑叶总生物碱最佳提取工艺采用超声波辅助提取探讨桑叶总生物碱最佳提取工艺。首先通过单因素试验得到提取条件:提取溶剂50%乙醇-0.025 mol/L盐酸,料液比1:20,提取温度40℃,提取时间10min,提取次数2次。后采用正交试验考察各因素对桑叶总生物碱提取影响的显著水平,发现各因素影响不显著。最后得出桑叶总生物碱最佳的提取工艺:提取溶剂30%乙醇-0.025 mol/L盐酸,料液比1:20,提取温度30℃,提取时间10min,提取次数2次。在此工艺条件下湖桑32桑叶总生物碱提取量为2.1176mg/g。3、桑叶总生物碱和DNJ含量分析采用桑叶总生物碱最佳提取工艺测定分析了52份桑树种质资源的总生物碱和DNJ含量。结果显示各资源间桑叶总生物碱和DNJ的含量差异明显,新疆药桑桑叶总生物碱和DNJ含量都显著超过其他种质资源。嫩叶中总生物碱和DNJ的含量最高,随着桑叶的发育成熟,其含量逐渐降低。对2份资源桑叶不同时期生物碱的含量差异分析发现,桑叶总生物碱含量由春季到秋季,依次增高,而桑叶DNJ含量9月最高,10月有所下降。但是并不是所有种质资源桑树生物碱含量都是秋季高,春季低,贵14的生物碱含量与季节的关系恰恰相反。云系列桑叶的生物碱含量与叶型有关,裂叶和全+裂叶类型桑叶总生物碱含量普遍较高,而DNJ常富含于裂叶和全叶类型。