论文部分内容阅读
胃癌(gastric cancer,GC)在全球范围内拥有较高发病率,据世界卫生组织统计,2012年,全球大约新发胃癌951,600例,723,100名患者死于胃癌,是因癌症导致死亡的第二大原因。手术切除是当前胃癌根治性治疗的主要方法,但是,标准手术治疗后的复发和转移导致晚期胃癌患者生存率显著降低。常规挽救性化疗获益有限,因此,胃癌治疗的新靶点和新方法亟待研究。microRNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,通过抑制或降低其靶向mRNA的翻译来发挥转录后调控的作用。根据最近的报道,一些miRNA通过影响其下调靶标而参与了胃癌的发展和进程。例如,miR-520c通过抑制胃癌细胞中的IRF2来增强癌症细胞增殖,迁移和侵袭。miR-186通过抑制Twist1影响人胃癌细胞增殖,侵袭和迁移。miR-137通过靶向调节KLF12和MYO1C在胃癌细胞系中发挥抑癌作用。这些研究表明miRNA在胃癌发生发展中发挥了重要作用。miR-129-5p在包括胃癌在内的多种恶性肿瘤中起着抑制癌症发生发展的作用。例如,miR-129-5p通过靶向下调APC抑制喉鳞状细胞癌的生长并诱导其凋亡。在胃癌中,miR-129-5p通过下调IL-8参与了胃癌细胞的迁移和侵袭,通过抑制COL1A1降低胃癌的侵袭和增殖。可以看到,既往研究已证实miR-129-5p在胃癌发生发展中发挥了作用,具备成为治疗靶点的潜在价值,仍有继续研究发掘的必要。本文就上述难点和热点从以下三个方面进行了研究:第一部分miR-129-5p在胃癌组织和胃癌细胞系中表达差异;第二部分miR-129-5p对胃癌细胞增殖和侵袭的影响;第三部分miR-129-5p通过靶基因ADAM9参与胃癌细胞增殖和侵袭的调控。第一部分:miR-129-5p在胃癌组织和胃癌细胞系中表达差异目的:探究miR-129-5p在胃癌组织和胃癌细胞系中表达差异及其意义。方法:收集临床实施胃癌根治性切除手术患者的胃癌组织样本,采用RT-qPCR方法探究miR-129-5p在胃癌患者癌组织和癌旁组织中的表达差异,根据差异追踪患者生存时间,探索miR-129-5p与胃癌患者生存期的关系。结果:1收集临床50例行胃癌根治性切除手术患者的组织样本,通过RT-qPCR方法检测组织样本中miR-129-5p表达,结果显示不同样本间有显著差异;2根据miR-129-5p的表达差异将胃癌患者分为两组,进行生存分析,结果显示miR-129-5p高表达组患者的总体生存时间显著高于miR-129-5p低表达组;3对后期用于实验的三个胃癌细胞系(MKN-45,BGC-823和SGC-7901)及一个胃黏膜细胞系(GES-1)进行miR-129-5p表达量检测,结果显示胃癌细胞系中miR-129-5p表达明显低于胃黏膜细胞系。结论:相较于正常胃黏膜组织细胞,在胃癌组织细胞中miR-129-5p表达水平降低,较低水平的miR-129-5p表达与胃癌患者的不良预后有关。第二部分 miR-129-5p对胃癌细胞系增殖和侵袭的影响目的:在胃癌及胃黏膜细胞系中研究miR-129-5p对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:根据 miR-129-5p 序列合成 miR-129-5p mimic 和 miR-129-5p inhibitor,转染三株胃癌细胞系及一株胃黏膜细胞系,检测细胞的增殖和侵袭能力。结果:1人工合成的miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor能有效增强和抑制miR-129-5p在细胞系中的表达;2 miR-129-5p mimics能显著降低SGC-7901和MKN-45的增殖能力,miR-129-5p inhibitor 能显著增加 SGC-7901 和 MKN-45 的增殖能力;3 miR-129-5p mimics能显著降低SGC-7901和MKN-45的侵袭能力,miR-129-5p inhibitor 能显著增加 SGC-7901 和 MKN-45 的侵袭能力。结论:体外实验表明:增强miR-129-5p的表达可降低胃癌细胞增殖和侵袭能力,抑制miR-129-5p的表达可增强胃癌细胞增殖和侵袭能力。第三部分 miR-129-5p通过靶基因ADAM9参与胃癌细胞增殖和侵袭的调控目的:探究miR-129-5p如何参与胃癌细胞增殖和侵袭的调控。方法:利用miRanda预测miR-129-5p的靶基因,结合pMIRGLO双荧光素酶报告系统验证靶基因,通过人为过表达靶基因,探究miR-129-5p参与胃癌细胞增殖和侵袭的作用形式。结果:1 miRanda预测ADAM9是miR-129-5p的靶基因,双荧光素酶报告系统验证了这一假设。2选取ADAM9表达量最低的MKN-45细胞系,pcDNA3.1质粒载体过表达ADAM9后,转染miR-129-5p mimic可以抑制ADAM9的升高,同时逆转细胞因过表达ADAM9造成的增殖力升高和侵袭力增强。结论:miR-129-5p通过靶向调控ADAM9基因参与胃癌细胞增殖和侵袭,增强miR-129-5p表达,可降低ADAM9表达水平,在胃癌中起肿瘤抑制作用。因此,miR-129-5p可能是胃癌靶向治疗的潜在目标。