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心肌肌钙蛋白I（cTnI）为心脏所独有,在发病后出现时间早,敏感度高,特异性好,持续时间长,已被认为是诊断心肌损伤,尤其是急性心肌梗塞（acute myocardial infarction,AMI）的金指标。针对cTnI这个指标,世界上已经有许多相应的检测产品,这些产品中所用到的抗体大部分都是使用提纯的人cTnI作为免疫抗原免疫动物得到的抗体。至今为止,我国一直没有研制出国产的检测cTnI的试剂盒,在临床上用于检测cTnI的试剂盒都依赖于进口,价格昂贵,给病人带来了较大的负担。由此,本实验室致力于研制自主开发的cTnI检测试剂盒。本工作选取了人cTnI的稳定区段的两个特殊抗原决定簇位点作为操作序列,两者之间由免疫活性极低的5Lys连接,5Lys隔离两个抗原决定簇位点的同时可以降低连接部位的免疫原性。将含有两个特殊抗原决定簇位点的5个重复基因片段接入pET30a、pET28a、pBAD-His表达载体中都没有成功纯化出Antigen抗原多肽。利用BamHI/BgLⅡ两限制性内切酶的同尾酶作用把此基因片段接入pMAL-p2x表达载体内的MBP（麦芽糖结合蛋白,分子量为45kD）之后,共5个重复序列,构成pMAL-Antigen表达载体,通过用1.0mM·L-1的IPTG诱导,结果表达出的MBP-Antigen融合蛋白的大小比理论值小,通过FactorXa蛋白酶切证明了Antigen抗原多肽确实存在着降解问题。经过Amylose-resin亲和层析柱可纯化出纯度达95%以上MBP-Antigen融合蛋白。MBP-Antigen融合蛋白可作为大分子量的免疫抗原,增强了Antigen抗原多肽的免疫原性。将此抗原免疫BABL/C小鼠,取免疫过的小鼠的抗血清,用人cTnI和牛cTnI作为检测抗原,经ELISA法检测其抗体效价及特异性。结果表明,抗体稀释6400倍时,抗体效价约为0.1,抗体效价虽然不是很高,但是存在着对应人cTnI的稳定区段的两个特殊抗原决定簇位点的抗体,为以后的单克隆抗体制备提供了基础。