【摘 要】
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目的:研究4-BDE对睾丸支持细胞凋亡的影响,探讨Fas/Fasl信号通路在4-BDE诱导睾丸支持细胞凋亡中的相互调控作用机制,为4-BDE导致雄性生殖毒性提供理论与实验依据。方法:1.选取不同浓度的4-BDE染毒大鼠睾丸支持细胞24h,用CCK-8法检测细胞存活率,选取合适的4-BDE浓度（低、中、高浓度组）,并设定空白组和DMSO溶剂组;2.流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI双染
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目的:研究4-BDE对睾丸支持细胞凋亡的影响,探讨Fas/Fasl信号通路在4-BDE诱导睾丸支持细胞凋亡中的相互调控作用机制,为4-BDE导致雄性生殖毒性提供理论与实验依据。方法:1.选取不同浓度的4-BDE染毒大鼠睾丸支持细胞24h,用CCK-8法检测细胞存活率,选取合适的4-BDE浓度（低、中、高浓度组）,并设定空白组和DMSO溶剂组;2.流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI双染后睾丸支持细胞凋亡状况;3.q-PCR检测睾丸支持细胞中Fas、Fasl、FADD、Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达水平。4.WB检测睾丸支持细胞中Fas、Fasl、FADD、Procaspase-3、Procaspase-8蛋白的表达量。结果:1.4-BDE以剂量依赖方式诱导睾丸支持细胞凋亡,即随着4-BDE浓度增加,细胞总凋亡率逐渐增加。其中,160μg/ml和320μg/ml组细胞凋亡率较0μg/ml组明显上升,差异有统计学意义（P＜0.05）;80μg/ml组凋亡率较0μg/ml组略有增加,但差异无统计学意义（P＞0.05）。2.4-BDE诱导睾丸支持细胞凋亡相关mRNA指标转录水平升高。随着4-BDE染毒剂量的增加,Fas、Fasl、FADD、Caspase-3、Caspase-8的mRNA转录水平逐渐升高。与0μg/ml组相比,Fasl、FADD、Caspase-3、Caspase-8 mRNA转录量在80μg/ml和160μg/ml组明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）;320μg/ml组Fas、Fasl、FADD、Caspase-3和Caspase-8 mRNA的转录量显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。3.4-BDE诱导睾丸支持细胞凋亡相关蛋白表达量升高,酶原活化增加。随着4-BDE染毒剂量的增加,各染毒组处理的睾丸支持细胞细胞Fas、Fasl、FADD蛋白表达量显著增加,Procaspase-3及Procaspase-8蛋白表达量显著减少。具体而言:与0μg/ml组相比,80μg/ml染毒组Fas、FADD蛋白表达量显著增加,差异有统计学意义（P＜0.01）;Fasl蛋白表达量略有增加,但差异无统计学意义（P＞0.05）,Procaspase-8和Procaspase-3蛋白表达量减少,差异无统计学意义（P＞0.05）。160μg/ml染毒组Fas、Fasl、FADD蛋白表达量显著增加,差异有统计学意义（P＜0.01）,Procaspase-3蛋白表达量减少,差异有统计学意义（P＜0.05）,Procaspase-8表达量依旧减少,但差异无统计学意义（P＞0.05）。320μg/ml组Fas、Fasl、FADD蛋白表达量增加明显,差异有统计学意义（P＜0.01）,Procaspase-3和Procaspase-8蛋白表达量下降明显,差异也具有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.4-BDE可剂量依赖性诱导睾丸支持细胞凋亡。2.4-BDE可能通过Fas/Fasl调控Caspase,并最终参与了睾丸支持细胞凋亡的进程。
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