MiR-101靶向调控E盒锌指蛋白1(ZEB1)抑制肺癌生长和转移的作用与机制研究

来源 :中国人民解放军空军军医大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wangzhanglu
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背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要病理类型,约占肺癌发病总人数的85%,5年生存率较低。近年来,随着分子生物学的快速发展,极大的提高了NSCLC患者早期检出率及治疗效果。但在一定程度上对诱发疾病的某些分子机制仍缺乏深入的了解,使得一部分患者的治疗效果不尽如人意。诸多的miRNAs参与了肺癌的发生与发展,其中miR-101通过对细胞增殖和转移的负调控,显示出其可能为NSCLC发生发展中的关键调控分子。目前,miR-101在NSCLC中的潜在分子机制在很大程度上仍未知。目的:以NSCLC组织标本为研究对象,研究miR-101及E盒锌指蛋白1(ZEB1)在NSCLC的癌组织和癌旁组织中的表达差异及与预后的相关性;通过体内及体外实验,调控miR-101及ZEB1的表达,探讨miR-101靶向ZEB1抑制NSCLC的生长和转移的作用及机制。方法:1、应用RT-PCR检测NSCLC癌组织与癌旁组织中miR-101及ZEB1 mRNA的表达,应用Western Blot检测NSCLC癌组织和癌旁组织中ZEB1蛋白的表达;2、应用RT-PCR检测NSCLC细胞系与正常人支气管上皮细胞系中miR-101的表达,应用Western Blot检测NSCLC细胞系与正常人支气管上皮细胞系中ZEB1蛋白的表达;3、通过上调A549细胞中miR-101及ZEB1的表达,体外观察各组细胞生长和迁移能力的差异;4、通过上调miR-101和下调ZEB1表达,体内观察各组SCID小鼠皮下肿瘤生长及肺部肿瘤转移的差异。5、通过TargetScan数据库筛选发现miR-101与ZEB1具有互补序列;通过双荧光素酶报告系统证实ZEB1是miR-101的靶基因;通过RT-PCR和Western Blot方法验证ZEB1是miR-101的靶基因;6、通过Western Blot的方法进一步探讨miR-101靶向调控ZEB1抑制NSCLC生长和转移的机制。结果:1、miR-101在NSCLC癌组织和细胞系中的表达显著低于癌旁组织和正常的支气管上皮细胞,ZEB1的表达与之相反;miR-101的表达与淋巴结转移呈负相关;2、单独上调miR-101的表达可以抑制NSCLC细胞的增殖、凋亡抵抗、迁移和侵袭,同时上调miR-101和ZEB1表达时,上述抑制作用明显减弱;3、上调miR-101的表达抑制SCID小鼠体内肿瘤的生长和转移,下调ZEB1的表达也可以产生相似的抑制作用;4、双荧光素酶报告系统提示ZEB1是miR-101的直接调控靶点,miR-101通过靶向调控ZEB1抑制NSCLC的恶性表型。主要作用机制为:miR-101抑制ZEB-1介导的EMT的发生;下调CyclinD1的表达、上调Rb的表达抑制细胞的增殖,下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达、增加caspase-3活性促进细胞的凋亡。结论:本研究表明,miR-101通过靶向调控ZEB1抑制NSCLC的生长和转移,提示miR-101是NSCLC生长及转移过程中的关键分子,可以为NSCLC的治疗提供新的途径。
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