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研究背景与目的原发性肝癌(HCC)是严重危害人类健康的恶性肿瘤,其在我国及全球的发病率都较高,,目前对其主要的治疗措施是手术切除辅以化疗,但术后肝癌的复发率较高,且患者预后普遍较差[1];相关研究提示,肝癌的发生发展是多基因间相互调控的复杂过程[2],一些癌基因、抑癌基因以及肿瘤相关基因的激活或失活与肝癌的发生有着千丝万缕的联系,肝癌的基因治疗在近年来已具有较好的研究前景。COMMD7基因为近年来新发现的一条功能未知的基因,该基因位于20号染色体上20q11.22[3],研究提示,一种由大约由200个氨基酸组成的多功能蛋白被该基因编码[4],我们经过前期大量研究发现,与其他正常肝组织相比,COMMD7基因在肝癌组织中的表达强度明显增高,且其表达强度与肿瘤侵犯的广泛程度呈正相关[5]。初步的研究结果提示,沉默HepG2细胞COMMD7基因,再用基因芯片检测发现,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的下游分子ELK4及DUSP4表达下调,推测COMMD7基因可能通过活化ERK/MAPK信号通路促进HepG2细胞的生长增殖,肿瘤研究已经证实,MAPK通路参与细胞增殖、分化、转化及凋亡的调节,与肿瘤的发生密切相关[6-8]。但COMMD7基因是如何通过ERK/MAPK信号通路来调节HepG2细胞的增殖的呢?其具体作用环节及分子机制尚不清楚。本研究拟先用小RNA干扰技术沉默COMMD7基因,在观察HepG2细胞活力及其凋亡状况的同时,再用Western Blot检测MAPK通路中ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2等关键分子表达的变化,明确COMMD7基因活化ERK/MAPK通路的具体作用环节,阐明其促进HepG2细胞增殖的分子机制,为进一步的肝癌基因治疗打下基础。方法1.建立沉默COMMD7基因的细胞模型:构建含有COMMD7基因小干扰RNA的慢病毒载体,转染HepG2细胞,用PCR、免疫荧光及WB技术验证干扰效果,筛选干扰稳定的细胞株,常规传代培养,实验分为3组:空白组;空载体转染的阴性对照组(NC组);慢病毒转染的阳性实验组(实验组)。2.用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法和流式细胞术分别检测上述各组细胞的活力和凋亡情况,明确COMMD7对HepG2细胞的增殖的影响。3.在检测细胞增殖凋亡的同时,用Western Blot检测MAPK通路中ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2等蛋白的表达变化,明确其具体的作用环节。结果1.成功构建COMMD7基因的干扰模型,慢病毒转染细胞48h后,测得实验组COMMD7的相对表达量较空白组及NC组明显降低;CCK-8结果显示实验组细胞活力较空白组及NC组明显降低;流式细胞术结果表明实验组细胞早期凋亡率较空白组及NC组明显增高;而以上各结果中空白组与NC组相比较均无明显变化。2.沉默COMMD7基因后,与空白组及NC组相比,实验组ERK/MAPK通路中p-ERK1/2、p-MEK1/2的表达量减低。结论1.沉默COMMD7基因可促使肝癌HepG2细胞的活力下降、凋亡增加。2.COMMD7基因可通过活化ERK/MAPK信号通路促进HepG2细胞增殖,其具体的作用环节可能为促进ERK1/2、MEK1/2的磷酸化的表达。