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口蹄疫(foot and mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急性、烈性传染病，但其免疫应答机制尚不清楚。适应性免疫应答的启动需要树突状细胞(dendritic cell，DC)的抗原提呈，并且DC还能交叉提呈非复制性抗原，故被称为机体最强大的抗原提呈细胞，但目前尚不清楚DC是否提呈FMDV抗原。FMDV主要经消化道、呼吸道和皮肤感染机体，并可在咽部大量繁殖。因此，咽部被认为是抗FMDV感染的重要器官。然而，目前不仅不清楚咽部粘膜组织在对口蹄疫病毒免疫应答中的作用，而且对牛咽部DC的分布情况也未见报道。本研究首先用免疫组织化学法对10头乳牛咽部及其引流淋巴结内的DC进行了观察。结果发现，不仅咽部粘膜中有大量DC成群分布，引流淋巴结皮质中的滤泡DC和并指状DC清晰可辨，而且在淋巴结髓质也有大量S-100+DC分布。为探明咽部DC是否参与FMDV抗原提呈，研究者模拟自然感染途径给BALB／c小鼠口服接种了FMD灭活疫苗，然后，比较不同时间内咽部引流淋巴结内DC的动力学变化。结果发现，口服FMDV灭活疫苗24h后，小鼠颈浅淋巴结内DCs数量就有增多，散在分布于皮质区，48h时后小鼠颈浅淋巴结内DCs数量明显增多，并且主要分布于副皮质区，在72h后，咽部DCs向颈浅淋巴结副皮质区的迁移达到顶峰，至96h，颈浅淋巴结内DCs的数量急剧下降，在皮质区和副皮质区内呈现散在分布状，然而，120h后，颈浅淋巴结内DCs数量再次增多，且主要分布于皮质区。而PBS对照组未见类似改变。同时，用ELISA法对口服接种FMD灭活疫苗不同时间的小鼠血清IFN-γ水平进行了检测，结果显示，接种疫苗24h后，小鼠血清内的IFN-γ含量就开始升高，但与PBS对照组相比差异不显著(P＞0.05)，而48h后，接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量明显升高，与PBS对照组相比，差异极显著(P＜0.01)。在接种72h后，接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量达到最高峰，与PBS对照组相比，差异极显著(P＜0.01)。96h后，IFN-γ含量开始下降，与PBS对照组相比，差异显著(P＜0.05)，到120h时，与PBS对照组相比差异不显著(P＞0.05)。以上结果表明，咽部DC就是FMDV抗原的提呈细胞，为了进一步研究DC提呈灭活FMDV抗原的分子机制，研究者首先制备了BALB／c小鼠的单核细胞源DC，并分别用免疫组织化学法和流式细胞术鉴定了DC。将FMD灭活疫苗荷载于DC，并进行细胞培养，然后在不同时间点用Western blotting法做检测DC内的泛素化蛋白。结果发现，在荷载灭活FMD疫苗0.5h后，DC内就出现了泛素化FMDV蛋白，分子量大约为75kD，3h后，泛素化蛋白含量稍有增加，但从不同时间点来看，泛素化蛋白含量变化趋势不明显。本试验首次发现，将FMD灭活疫苗荷载于DC后，FMDV泛素化蛋白主要被FK2抗体标记，而FK1抗体标记的较少。这表明，灭活FMDV疫苗抗原在DC内既可在蛋白酶体的作用下降解出CD8+T细胞表位，又可在溶酶体内水解，产生CD4+T细胞表位。由于BALB／c小鼠口服接种灭活FMDV疫苗后，可使其血清内IFN-γ含量明显升高，所以，尽管FMDV抗原可以在溶酶体内降解，但由此过程所产生的抗原表位加载于MHC-Ⅱ类分子后，主要启动了初始CD4+T细胞向Th1细胞的分化。总之，DC不仅是FMDV抗原的提呈细胞，而且FMDV抗原被DC捕获后既可被泛素-蛋白酶体降解，也可在溶酶体内被加工处理。