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天然V_E作为天然的保健品,相比于合成V_E在手性纯度、生物活性、生物利用度和安全性方面都有较大的优势。大豆油在世界范围内是一种最重要的商品植物油,而其脱臭过程产生的馏出物中V_E含量一般在6.0～12.0%。工业上,一般采用分子蒸馏法从大豆油脱臭馏出物中提纯天然V_E,而由于其中的游离脂肪酸沸点和V_E相近,在蒸馏前必须将其转化为脂肪酸甲酯以降低其沸点而有利分离。本文首先对大豆油脱臭馏出物(SODD)的理化性质进行检测,测得其酸值为75.03±0.34 mg KOH/g、皂化值为159.65±1.14 mg KOH/g、水分及挥发物含量为1.976±0.018%以及V_E的含量为6.02±0.08%;另外还对大豆油脱臭馏出物进行了酶法水解处理,调节其中的游离脂肪酸含量,以便于在后续的酶法酯化过程中提供不同初始酸值的原料,优化后的水解条件为:缓冲液量30%、pH 8.2、酶量25 U/g-底物、45℃、200 rpm/min水浴摇床振荡反应12 h,水解后酸值为102.74±0.45 mgKOH/g。其次在无有机溶剂体系中,利用假丝酵母脂肪酶(Candida rugosalipase)催化游离脂肪酸与甲醇反应,通过各单因素实验考察和Plackett-Burman试验设计筛选出水含量、酶用量和温度三个对甲酯化影响最大的因素,并进一步通过中心复合实验设计得到了反应的最佳条件:水含量21.05%,pH 8.2、甲醇4M(mol:mol游离脂肪酸)分四步等量添加(间隔3h)、酶用量115.45 U/g-底物、反应温度28.95℃和时间18h,此时酸值下降率达到93.85%,相比于优化前有一定的提高。重复五次的验证试验,酸值降低率为93.68±0.28%,试验值与预测值吻合情况良好。而反应后所得的油料中,天然V_E的含量为5.86±0.28%,相比原料中所含的6.02±0.08%并没有明显的损失,表明酶法甲酯化是可行的预处理方法。最后,为了使本工艺更好的应用于工业生产,本文对脂肪酶进行了初步固定化研究。经固定化载体和介质选择,选用弱极性大孔树脂AB-8做固定化吸附载体,在Tris-盐酸缓冲液中进行吸附假丝酵母脂肪酶制备固定化脂肪酶。通过单因素考查和响应面优化,固定化最佳工艺为:0.5 g树脂,5 mL缓冲液(pH 7.32)、固定化温度24.9℃、固定化时间3.86 h、给酶量50 mg/g树脂和振荡速率150 rpm/min,固定化酶活为112.58 U/g,与预测值吻合良好。所得的固定化酶,经催化大豆油脱臭馏出物甲酯化研究,催化过程中体系所需水含量明显减少,重复利用3次,酯化率均在85%以上。但本研究中的固定化酶,使用5次后,酯化率由最初的89%降至25%,还需进一步研究以增加固定化酶的催化效率和操作稳定性,从而提高其回收利用次数。