【摘 要】
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该实验室曾以水稻蜡质基因(waxy)上游-840bp——810bp之间一段能增强基因表达,并能与水稻胚乳核蛋白结合的31bp顺序为鱼饵,利用酵母单杂交系统从水稻cDNA表达文库中筛选到3个
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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该实验室曾以水稻蜡质基因(waxy)上游-840bp——810bp之间一段能增强基因表达,并能与水稻胚乳核蛋白结合的31bp顺序为鱼饵,利用酵母单杂交系统从水稻cDNA表达文库中筛选到3个编码DNA结合蛋白的阳性克隆(pC5、pC73和pC89).其中的一个阳性克隆pC5中C5cDNA的编码基因被称为OsBP-5(Oryzasativa Binding Protein).该研究对OsBP-5 cDNA编码蛋白的结构和功能进行了研究.主要在以下几方面取得了进展:1.OsBP-5的结构特征.对OsBP-5 cDNA进行了序列测定,它的长度为1430bp,编码一个含335个氨基酸的蛋白质.2.OsBP-5了在水稻中的表达.用Northern印迹的方法检测到OsBP-5基因在水稻的叶、根和未成熟种子中均有表达.3.osBp-5的DNA结合功能域和活化功能域.在大肠杆菌BL21/(DE3)中表达并纯化了融合蛋白His-C5 (称为P5H).4.osBP-5与另一个转录调节蛋白的相互作用.通过酵母双杂交的方法观察到OsBP-5蛋白能与另一个用31bp顺序分离到的转录调节蛋白OsEBP-89相互作用.5.OsBP-5与OsEBP-89的协同调控作用.我们实验室以前的研究表明OsEBP-89蛋白与31bp序列的结合能力较弱,但它含有激活功能域.而OsBP-5蛋白能与31bp序列结合,但没有激活功能.6.OsBP-5对waxy基因表达的影响.利用双链RNA干扰技术抑制水稻内源OsBP-5基因的表达水平,RNAi转基因水稻植株生长正常,外观形态与亲本植株没有明显变化.Northern分析显示转基因植株中内源OsBP-5基因的mRNA积累有明显的下降.
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