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中华鳖（Pelodiscus sinensis），俗称甲鱼，隶属于爬行纲、龟鳖目、鳖科，是我国南方重要的名特优水产养殖品种。养殖过程中，雄鳖比雌鳖生长快25.0%～30.0%，且雄鳖裙边宽厚，脂肪少，深受市场欢迎，同比单价雄鳖比雌鳖高25%。鉴于此，业内围绕中华鳖性别控制开展了一系列的技术探索，但仍无法使雄鳖苗比例超过65%，这主要是因为中华鳖性别决定分子机制的不清楚。为了揭开中华鳖性别决定分子机理的神秘面纱，本文以雄性性别相关基因DMRT1（double sex and mab3relatated transcription factor1）为切入点，以其cDNA全序列的克隆为基础，研究DMRT1基因在不同组织和不同发育阶段雌雄性腺中的表达情况、细胞定位以及在雌激素诱导的性逆转中的表达变化。本研究旨在初步探索DMRT1基因在中华鳖性别决定中的调控作用，为后续DMRT1的功能研究、中华鳖单性育种及性别决定分子机制研究奠定基础。具体研究结果如下：（1）通过RACE的方法获得了DMRT1基因全长cDNA序列，该序列为2409个碱基，其中开放阅读框（ORF）为1107个碱基，编码368个氨基酸。cDNA全长中还包含5′非编码区的67个碱基，一个长的3′非编码区的1058个碱基，以及终止密码子TAA和多聚A尾巴。根据NCBI网站的氨基酸序列BLAST分析，得到中华鳖与龟鳖类同源性最近，尤其与西部锦龟相似度最高，其次与鳄类动物也有很近的亲缘关系。另外对中华鳖心、肝、脾、肺、肾、肌、卵及睾丸中DMRT1基因mRNA表达检测，发现DMRT1基因只在睾丸组织中大量表达，而其他组织不表达。这说明中华鳖DMRT1基因呈现高度雄性特异性表达。（2）为了研究DMRT1在中华鳖雄性性腺发育中的作用，本实验首先分析了DMRT1在不同发育时期性腺中的表达规律和细胞定位。免疫荧光染色结果显示：在性腺分化之前的第16期雄性性腺中, DMRT1蛋白开始表达，定位在体细胞核中，生殖细胞中未见表达。第17期时，雄性性腺中的DMRT1蛋白表达量显著增加，雌性性腺中未见表达。性腺发育至第19期时，性腺分化已经开始，DMRT1蛋白大量定位于雄性性腺Sertoli前体细胞细胞核中，围绕原始生殖细胞。随着胚胎进一步发育，雄性性腺皮质区进一步退化形成单细胞层，髓质区继续发育形成性索，DMRT1蛋白大量表达，继续定位在Sertoli前体细胞上。而雌性性腺皮质进一步发育，髓质退化并出现空泡结构，未见DMRT1蛋白表达。出生后，中华鳖雄性性腺不断发育形成睾丸，原始性索发育形成曲细精管，由sertoli细胞围绕形成，将各级生殖细胞包绕起来。在1-3龄中华鳖睾丸中，DMRT1蛋白继续分布在曲细精管基部的sertoli细胞上，各级生殖细胞未见表达。在3龄中华鳖卵巢中，未见DMRT1蛋白表达。基于16-19期为中华鳖性别决定和性腺分化的关键时期，以上实验结果表明，DMRT1基因极可能在中华鳖早期雄性性别分化中扮演调控角色。（3）在大部分脊椎动物中，雌激素在性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。本实验通过对性别分化前胚胎进行雌二醇（E2）和芳香化酶抑制剂（AI）处理，研究雌激素在中华鳖性腺分化中的作用及机理。实验结果显示，与对照组（雌性比例49%）相比，E2处理组中雌性中华鳖仔鳖比例显著增加，高达92.3%；而在AI处理组中，雌性比例显著下调至13.1%。雄性ZZ胚胎经过E2处理后，性腺结构明显雌性化，雄性特异性基因SOX9mRNA表达显著下调；雌性ZW胚胎经过AI处理后，性腺结构呈现雄性化特征，雄性特异性基因SOX9表达显著上升，说明雌激素在中华鳖雌性性别分化中起着重要的调控作用。基于此性激素诱导的性逆转模型的建立，本文还分析了DMRT1基因在性逆转中的表达变化。RT-PCR和免疫荧光染色结果显示：在E2诱导的雄性向雌性性逆转过程中，DMRT1基因表达显著下降；AI诱导的雌性向雄性性逆转过程中，DMRT1基因则被诱导表达。以上结果表明，DMRT1参与中华鳖雄性性别分化过程。本文研究结果表明DMRT1基因为中华鳖雄性特异性基因，参与雄性性腺分化过程，为后续DMRT1的功能研究奠定基础。