王浆主蛋白MRJPs对果蝇的抗衰老功能及分子机理研究

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蜂王浆(RJ)是由5-15d工蜂头部营养腺(舌腺和鄂腺)分泌,专供蜂王和3d的幼虫食用的营养物质。蜂王浆的化学成分极为复杂,其中蛋白质是主要营养和功能成分,其含量约占王浆干物质的50%。王浆蛋白分为水溶性及非水溶性两大类,其中可溶性蛋白约占王浆总蛋白的82~90%,被称为王浆主蛋白(MRJPs)。本实验首先从液料比、离子强度、pH和抽提时间4个单因素出发,结合蛋白稳定性、生产成本等因素,进行了L9(34)正交实验,作MRJPs提取工艺优化。正交实验结果显示,对MRJPs提取率影响因素从高到低依次是:离子强度、pH、抽提时间和液料比,但是影响效果均不显著0>0.05)。最佳提取条件为:液料比8:1(V/W),离子强度0.5,抽提pH8.0,抽提时间8h。在最佳提取工艺下,MRJPs提取率为81.14%。对提取MRJPs后的副产物回收冻干,测得10-羟基-2-葵烯酸(10-HDA)和总糖回收利用率分别为2.91%、1.26%。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,所提取的MRJPs蛋白分子量与分布与报道相符。其次,用添加1.25%、2.50%、5.00%MRJPs的饲料为实验组,以基础饲料和添加1.25%酪蛋白的饲料为阴性和阳性对照,分别培养Canton-S野生型果蝇。结果显示,与阴性和阳性对照相比,5.00%MRJPs干预使雄性果蝇的平均寿命分别延长11.93%和7.78%,2.50%MRJPs干预使雌性果蝇的平均寿命分别延长8.98%和7.40%(p<0.05),表明MRJPs能显著延长雌雄果蝇的平均寿命。进一步作摄食量和繁殖力比较,发现MRJPs能显著提高果蝇的摄食量和繁殖力(p<0.05),显示这两种因素变化对果蝇的衰老无负面影响。然后测定了7d和21d各处理雌雄果蝇的铜锌超氧化物歧化酶[SOD(Cu, Zn)](?)舌力和丙二醛(MDA)含量变化,结果显示MRJPs可提高雌雄果蝇的SOD(Cu, Zn)活力,降低雌雄果蝇体内的MDA含量(p<0.05)。最后,以核糖体蛋白49(rp49)为内参基因,测定了21d果蝇体内SOD(Cu,Zn)、外表皮生长因子受体(Egfr)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核糖体蛋白S6激酶(S6K)基因的相对表达量,结果显示MRJPs能调控衰老导致的这4对基因下调。本研究在国际上首次证实了纯MRJPs对果蝇的抗衰老功能,以及相关作用的生化和分子机理,为王浆蛋白抗衰老功能食品的进一步研究开发提供了重要依据。
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