背景咽喉反流疾病患病人数多,在耳鼻咽喉科门诊大约占10%.胃内容物反流至咽喉,损伤咽喉粘膜,是耳鼻咽喉专科疾病的一个重要病因。但目前学界关于咽喉反流疾病的发病机制、诊断和治疗存在诸多问题。咽喉反流疾病的病变程度与反流物成分、反流频率以及持续时间有关。由于正常咽喉环境pH相关参数及喉咽部胃蛋白酶表达量的正常值范围尚不明确,因此咽喉环境pH值、反流暴露次数、咽喉部胃蛋白酶量各自达到何种水平即发生病理性改变,目前并没有统一的标准和客观证据。24小时pH监测是临床认可的诊断咽喉反流疾病的客观方法,目前pH监测诊断咽喉反流疾病的参数均采用胃食管反流疾病的参数指标。但大量研究表明咽喉反流疾病与胃食管反流疾病在临床症状、病理生理以及临床后遗症方面均不完全相同。采用胃食管反流暴露事件的诊断标准,只关注pH小于4的监测参数,会低估咽喉反流暴露次数,出现较高漏诊率。24小时口咽Dx-pH监测区别于既往食管pH监测,敏感性高,是专门用于检测咽喉反流的设备,已引起越来越多的学者重视。然而基于该设备的研究结果表明,正常人咽喉环境中是否存在生理性pH<4酸反流暴露存有争议,不同基线pH条件下的反流暴露次数和时间百分数正常值范围也存在较大差别,因此正常人咽喉环境pH及pH相关参数正常范围目前尚不确切。胃蛋白酶作为咽喉反流疾病的重要损伤因素,随反流物到达咽喉部时,可进入唾液中。已报道的采用不同的方法检测LPRD患者与健康志愿者唾液标本中的胃蛋白酶浓度的研究结果表明,唾液胃蛋白酶浓度检测是诊断咽喉反流疾病的简便无创、成本低廉的有效手段。然而目前关于健康人唾液中是否存在胃蛋白酶尚有争议,唾液胃蛋白酶浓度正常值并不确切,因此唾液中胃蛋白酶含量为何水平时,咽喉部便可出现病理性损伤也就无法界定。组织病理学检测属于直接定性诊断,常被人们誉为“金标准”。咽喉组织病理学检测胃蛋白酶虽属有创检查,但可直接、特异地诊断咽喉反流(酸性或非酸性反流),且证据等级高。但健康人咽喉黏膜中是否存在胃蛋白酶,文献报道存有争议,正常组织中胃蛋白酶的表达水平并不明确,故关于喉黏膜组织胃蛋白酶表达的病理性诊断标准也并不一致。此外文献中关于健康人群咽喉环境pH值、不同时间唾液胃蛋白酶浓度的范围及正常喉黏膜中胃蛋白酶表达水平的研究均出于不同的人群,尚无基于同一人群的三种诊断方法正常值研究。本研究旨在基于同一人群,运用Restech口咽Dx-pH监测,探索正常人群24小时口咽反流事件及pH值变化规律,并运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)探究正常人群24小时唾液胃蛋白酶浓度及变化规律,通过免疫组织化学技术研究正常人群中喉黏膜组织样本胃蛋白酶表达水平及意义,探讨正常人群咽喉反流体征量表的评分及意义,以期为后续研究制定咽喉反流疾病诊断标准提供参考。材料和方法本次研究自2016年9月至2017年12月于南方医科大学南方医院,招募符合纳入和排除标准的健康志愿者,并完成相应的临床检查和实验室检测项目,主要包括问卷量表调查、体格检查、电子鼻咽喉镜检查、口咽Dx-pH监测、唾液胃蛋白酶检测和室带黏膜组织胃蛋白酶病理学检测。所得的实验数据均采用SPSS23.0统计软件包进行统计学分析。检验水平P<0.05有统计学意义。结果1.本研究运用Dx-pH检测107例健康志愿者口咽环境pH平均6.59±0.34,不存在pH小于4的酸性反流,监测参数中pH高于6.5的时间百分数小于国外文献报道的结果,但24小时总时间、立位或卧位条件下,基线pH<6.5、6.0、5.5、5.0的监测参数高于国外文献报道的数值。2.不同时间点唾液胃蛋白酶浓度存在差异(P=0.004),晨起初觉醒时唾液胃蛋白酶浓度最高,中位数和四分位数间距为6.19(0,12.42)ng/ml;晚餐后1小时唾液胃蛋白酶浓度最低,中位数和四分位数间距为0(0,0)ng/ml。3.室带组织胃蛋白酶免疫组织化学染色结果表明部分正常人喉室带组织中可以检测到胃蛋白酶的表达。88例健康志愿者中6例阳性(6.8%),51例弱阳性(58%),31例阴性(35.2%),无强阳性染色,胃蛋白酶主要表达于鳞状黏膜上皮细胞质及细胞间质中。4.不同时间唾液胃蛋白酶浓度、喉室带组织标本胃蛋白酶免疫组织化学染色评分不存在性别差异,与年龄、BMI相关性不显著,胃蛋白酶受性别、年龄和BMI影响较小,是相对稳定可靠的诊断指标。5.正常人RFS评分服从正态分布,平均RFS评分为7.1±2.6。男性和女性健康志愿者RFS平均评分分别为8.3±2.5和6.1±2.3,二者差别具有统计学意义(P<0.001),男性RFS评分高于女性。结论1.正常人口咽环境pH值平均6.59±0.34,不存在pH<4的酸性反流。采用不同pH基线下Dx-pH监测参数95百分位数作为咽喉反流的诊断参考值有助于提高口咽Dx-pH监测诊断的特异性,应注意正常参考值范围可能存在地区之间的差异。2.胃蛋白酶是胃内容物反流至咽喉黏膜的标志,健康人唾液中可监测到胃蛋白酶。正常情况下,晨起初觉醒时唾液胃蛋白酶浓度高于餐前及餐后1小时的水平。晨起初觉醒时唾液胃蛋白酶浓度正常参考值范围为[0,55.39]ng/ml。3.部分正常人咽喉组织胃蛋白酶病理检测阳性,表明正常人可能存在生理性咽喉反流。4.健康人群RFS评分存在性别差异,男性高于女性。推荐正常男性RFS评分范围0～12分,正常女性RFS评分范围0～9分