【摘 要】
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研究背景与目的自体脂肪移植是当前治疗软组织缺损的首选方法,但存在移植物钙化等问题。利用脱细胞脂肪基质（Acellular adipose matrix,AAM）,是通过脂肪新生实现组织再生的新途径。AAM的再生活性与免疫原性的平衡,是制备方法需要考虑的。本课题组前期通过简化制备方法开发出物理法AAM,保留更多的活性蛋白成分,但对其可能残留的免疫原性未作深入探讨。本研究旨在探究可能存在的免疫反应对于
【基金项目】
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广州市科技计划项目（201604020007）；
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研究背景与目的自体脂肪移植是当前治疗软组织缺损的首选方法,但存在移植物钙化等问题。利用脱细胞脂肪基质（Acellular adipose matrix,AAM）,是通过脂肪新生实现组织再生的新途径。AAM的再生活性与免疫原性的平衡,是制备方法需要考虑的。本课题组前期通过简化制备方法开发出物理法AAM,保留更多的活性蛋白成分,但对其可能残留的免疫原性未作深入探讨。本研究旨在探究可能存在的免疫反应对于物理法AAM异种移植的体内成脂的影响。对移植物进行免疫修饰以抑制排斥反应,在移植医学领域的发展由来已久。最初的化学交联法,以戊二醛（Glutaraldehyde,GA）应用最广,但其修饰抗原表位的能力有限、细胞毒性大。免疫伪装是另一种免疫修饰手段,以甲氧基聚乙二醇（Methoxypolyethylene glycol,mPEG）应用最广。mPEG 的免疫修饰效果显著,相对无毒,商用广泛,逐步在输血及器官移植领域受到深入研究。本研究旨在利用脂肪移植模型,对比GA与mPEG的免疫修饰能力及其细胞毒性,选择更优的免疫修饰剂。脱细胞基质去除绝大部分细胞成分,但仍残留无法明确定量的抗原,可引起宿主免疫反应。但相较于新鲜组织移植,脱细胞基质更少地诱导促排斥的1型辅助性T淋巴细胞（Type 1 helper T cells,Th1 cells）型免疫反应,获得更好的体内移植结果。本研究旨在探究mPEG修饰对于物理法AAM体内成脂能力的影响,发现其可能的免疫学机制。研究方法1、HE染色行组织学分析;马松染色观察纤维化情况;免疫荧光染色观察脂肪新生、Th1细胞浸润水平。2、qRT-PCR 检测移植物 IL-2、IFN-γ、IL-4、PPAR-γ、CEBP-α 表达水平;ELISA检测宿主IgM、IgG水平。3、活-死细胞染色、CCK-8分析hASCs活率;流式细胞术检测凋亡细胞比例、Th1细胞比例。实验结果1、AAM移植裸鼠较移植BALB/c鼠的脂肪再生结果更好。2、mPEG修饰的脂肪移植物较GA组的纤维化程度低,炎症细胞浸润少,免疫排斥水平低。3、mPEG处理的hASCs较GA组的存活率高,凋亡细胞比例低。4、mPEG修饰的AAM移植物较未修饰组的脂肪再生结果更好,免疫排斥水平低。5、mPEG修饰后AAM对Naive CD4+T细胞向Th1细胞的促分化作用降低。结论1、物理法AAM所诱导的免疫反应,抑制其异种移植的体内成脂结果。2、mPEG比GA更显著地减轻异种脂肪移植的炎症及免疫排斥反应。3、mPEG的细胞毒性显著低于GA的细胞毒性。4、mPEG抑制物理法AAM异种移植的Th1型免疫排斥反应,促进其体内成脂。研究意义本研究首次将FDA批准且应用广泛的mPEG应用于AAM领域,通过其免疫伪装作用,另辟蹊径解决AAM的免疫原性残留问题,具有较高的临床应用价值及商品化潜能。
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