目的:建立大鼠NAFL及体外肝细胞脂肪变性与体内细胞脂肪变性和混合培养模型,探讨非酒精性肝(non-alcoholic fatty liver,NAFL)脂肪变性对星状细胞的直接活化作用,揭示NAFL肝纤维化的非炎症性机制。方法:体内实验:SD大鼠40只,随机分为模型组(n=20)和对照组(n=20),模型组大鼠以高脂饲料和普通饲料混合喂养20周建立NAFL模型,对照组大鼠以普通饲料喂养,每周测量体重和体长。3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉后提取肝脏,10%中性福尔马林溶液固定,中叶纵切取材制片。HE染色检测脂肪变性程度;Masson染色检测胶原蛋白分泌及纤维化程度;免疫组化(SP法)检测炎性促纤维化因子TGF-β1、PDGF及星状细胞α-SMA的表达;DN-3A显微图像分析系统对大鼠肝脂肪变性程度、胶原蛋白分泌及纤维化程度半定量分析。体外实验:分别以人肝细胞L-02和星状细胞LX-2为研究对象,含50%胎牛血清的RPMI1640培养液培养L-02制备肝脂肪变性的体外细胞学模型,L-02和LX-2混合培养模拟肝细胞-星状细胞相互作用,同时以单独培养及上清培养作为对照。油红O染色检测肝细胞脂肪变性;免疫荧光检测星状细胞α-SMA表达;蛋白印迹法(western blot,WB)检测Ⅰ型和Ⅳ型胶原蛋白的表达;倒置相差显微镜观察肝细胞、星状细胞、脂肪变性肝细胞形态;Image J软件测量并分析。IBM SSPS Statistics软件进行统计学分析。结果:体内实验:1.与对照组相比,模型组大鼠肝细胞显著脂肪变性(P<0.001),按程度将脂肪变性分为轻度(>20%)(26.23±7.40)%,中度(>30%)(33.54±4.22)%,重度(>40%)(43.69±9.13)%,极重度(>50%)(54.12±6.79)%四个等级,各等级之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。2.对照组大鼠仅在汇管区见少量胶原纤维,小叶内无胶原纤维;模型组大鼠肝小叶内肝细胞周围见胶原蛋白沉积,并与脂肪变性的程度相一致,而汇管区纤维化不明显。3.对照组大鼠肝汇管区见少量淋巴细胞散在浸润,肝小叶内无炎症细胞;模型组大鼠肝小叶内可见少量点状坏死灶伴炎性细胞灶状浸润。两组PDGF和TGF-β1表达均呈阴性。体外实验:1.含50%胎牛血清RPMI 1640培养液可诱导肝细胞发生脂肪变性,油红O染色可见多量脂滴。2.以10:1的接种密度进行L-02/LX-2混合培养可诱导LX-2α-SMA阳性表达,Ⅰ型、Ⅳ型胶原蛋白表达增加(P<0.01)。结论:非酒精性脂肪肝细胞周围出现显著胶原蛋白沉积,炎性细胞浸润较轻,α-SMA阳性表达,促纤维化因子阴性表达,提示肝细胞脂肪变性激活星状细胞,促进肝纤维化进程。