论文部分内容阅读
1967年南非Barnard首次在临床上成功地为1例病人施行了原位心脏移植术,其后美国及欧洲也相继开展。目前,该法已从一个激进而有争议的外科手段变成一种治疗终末期心脏病的重要方法。供心不足限制了心脏移植的发展,1994年后心脏移植例数不断下降。延长心脏保存时间,提高心脏保存效果,是扩大供心来源的有效途径。 现代研究证实,很多中药及中药有效成分具有抗缺血再灌注损伤和心肌保护作用。将中药及中药有效成分作为已有保存液的添加剂,以延长心脏的存活时间,开拓了心脏保存的研究思路,扩大了中药的应用范围。 本研究旨在对相关中药进行筛选,以期寻找到效果显著的中药添加剂,突破心脏的有效保存时限。 第一部分,为了能用最有限的经费,筛选大量的中药。寻找到保存离体心脏效果显著的中药,我们建立了小鼠Langendorff离体心脏灌注模型。该模型可观察离体心脏的收缩、舒张功能,心率及测取冠脉流量。实验表明,该模型稳定,能满足离体心脏保存研究中对大量药物进行药效筛选的需要。 采用小鼠Langendorff离体心脏灌注模型。将肌生(赤芝孢子粉加工而成)、红花、刺五加、血塞通(三七皂甙加工而成)和灯盏花等8种中药注射液添加到改良的细胞内液型保存液Euro-Collins(mEC)液中,以单纯mEC液为对照组,保存小鼠离体心脏3h、7.5h、9h。 保存3h的实验结果表明,5种中药均可不同程度的改善保存心脏的心功能、冠脉流量和再灌注结束后的心肌含水量。比较而言,肌生、红花和刺五加的保存效果较血塞通、灯盏花好。 以复温后心脏的复活率为主要指标,观察肌生、红花、刺五加、血塞通和灯盏花作为mEC液添加剂保存小鼠离体心脏7.5h的效果。结果显示,红花组心脏复活率明显高于对照组(p<0.01),刺五加组明显高于对照组,具有显著性差异(p<0.05),肌生组高于对照组,但无统计学意义。 以复温后心脏的复活率为主要指标,观察肌生、红花、刺五加、黄芪、川芎嗪和当归注射液保存小鼠离体心脏9h的效果。实验结果显示,红花组心脏复活率明显高于对照组具有极显著性差异(p<0.01),肌生组心脏复活率明显高于对照组,具有显著性差异(p<0.05)。药物组之间比较,红花的复活率最高,肌生次之,当归的复活率最低,刺五加、黄芪、川芎嗪三组复活率相同。复跳需时:红花组最低,川芎嗪组次之。心肌含水量:刺五加、黄芪的心肌含水量明显低于mEC组,具有极显著性差异(P<0.01)。 第二部分,采用大鼠Langendorff离体心脏灌注模型。将保存小鼠心脏效果较好的肌生、红花、刺五加、黄芪等4种中药注射液添加到改良的细胞内液型保存液Euro-Collins(mEC)液中,以单纯mEC液为对照组,保存大鼠离体心脏20h,4 肌生、红花等8种中药注射液用十心脏保仟的实验及机理研究实验结果表明,保存后心脏收缩功能,红花、黄茬及肌生组明显高于mEC组,具有极显著性差异(P<O.OI)。红花组明显高于黄蔑和刺五加组;具有极显著性差异 (P1.01);红花组高于肌生组,具有显著性差异(P叩.05)。保存后心脏舒张功能;红花、黄茂及肌生组明显高于mBC组;具有极显著性差异(p<0.OI)。红花组明显高于刺五加组,具有极显著性差异(p<0.01),高于肌生组;具有显著性差异(P叩.05)。保存后冠脉流量*F),红花及肌生组明显高于mEC组,具有极显著性差异(P<0.01),黄芭组高于mEC组,具有显著性差异(P<0.05)。红花组明显高于其它三个组,具有极显著性差异(p<0.01)。保存后黄民组的心肌含水量明显低于mEC组;具有极显著性差异(P<0.01)。 第三部分,对肌生、红花注射液的心脏保护作用机制进行了探计。 (1)对心脏保存效果较好的肌生、红花注射液对大鼠心脏心肌酶漏出及抗氧化作用的影响进行了研究。结果显示: 保存后 mEC组冠脉流液中的 LDH活性为 145.26 t 35.67,肌生组为 43.77 i13.25,红花组为 2 8.7 7 ti 4.2 5。肌生、红花组明显低于帕C组,具有极显著性差异(P<0.01)。保存后 mEC组冠脉流液中的 CK活性为 36.68,14.93,肌生组为1仁 89 t 3.5乙 红花组为 7.89 t 3.3人 肌生、红花组明显低于 mEC组,具有极显著性差异hq.01)。 保存后心肌组织中超氧化物歧化酶侣m的活性:二m组为305.66。兆.u,肌生组为344.71 37.75,红花组为346.76 i 38.89。肌生、红花组明显高于fllEC组;具有显著性差异(p<0.05)。保存后心肌组织中丙H醛(MDA)的含量:llEC为8.6O.41;肌生组为6.刀t 0 24,红花组为6.53 t 0.27。肌生、红花组明显高于m*C组,具有显著性差异(p<0.05)。 (2)对红花注射液对大鼠心肌组织能荷值及抗细胞凋亡基因 bC-2表达的影响,进行了研究。实验结果表明,红花厂)加入 mEC液中;40C保存大鼠心脏2 oh后;心肌组织能荷值与对照组相似;心肌细胞凋亡基因 bC-2的蛋白表达上调。 本课题研究表明,中药在心脏保存领域具有广阔的应用前景。红花具有较好的心脏保护作用,其机制可能与其改善