原发性肝癌是我国最常见的恶性肿癌之一，在国内和世界范围内都是最主要的癌症杀手之一，但肝癌的发生机制至今还不很明确。目前肿瘤干细胞理论已越来越受到普遍认可，肿瘤干细胞的存在对认识肿瘤发生的机制以及针对肿瘤的治疗都具有重要意义。由于至今尚未鉴定出肝癌干细胞，因此寻找肝癌干细胞的标志分子十分重要。 本研究首先对一些已知的可能成为肝癌干细胞表面标志的分子(c-met、c-kit、CD44及CD133)进行了筛选。研究表明约10％的小鼠H22肝癌实体瘤细胞(CD45-TER119)表达c-met，分析手术切除肝癌患者的肝癌细胞表明c-met表达介于1.5％-53.2％之间；体内成瘤实验表明，c-met<+>较c-met<->细胞亚群的成瘤性明显要高。 在鉴定出高致瘤性c-met<+>CD45<->肝癌细胞亚群的基础上，本研究进一步对c-kit、CD44和CD133进行了筛选。分析表明分别有0.2-0.5％、0.1％或0.5％的小鼠H22肝癌腹水细胞表达c-kit、CD44或CD133，但体内成瘤实验表明这些分子都可能不能成为肝癌干细胞的表面标志分子。 对已知的一些可能成为肝癌干细胞标志的分子进行研究是筛选肝癌干细胞标志的策略之一。此外，由于肿瘤干细胞与正常干细胞具有相似的特性与表面分子标志，因此通过鉴定出正常肝干细胞的特异性表达分子，也将为肝癌干细胞标志分子的鉴定提供重要参考价值。我们在后面的研究中利用蛋白质组学的方法进行了这样的一些初步探索。 首先我们建立了一种快速、高效、简单、经济的方法来分离纯化肝干/前体细胞，该方法利用免疫磁珠大量分选纯化c-Kit-(CD45/TER119)－肝干/前体细胞，大量高纯度的原代干/前体细胞的获得可为肝干/前体细胞蛋白质组学二维图谱的建立提供良好的原材料，并为比较蛋白质组学的研究提供良好的基础和依据。 随后的研究中，我们首次得到了一张原代c-Kit<->(CD45/TER119)肝干/前体细胞的二维电泳蛋白质图谱。通过对原代肝干/前体细胞和未分选的胎肝细胞的比较蛋白质学研究，我们发现共有19个蛋白点对应12个蛋白质在肝干/前体细胞中表达明显升高；一个十分有趣的发现是根据已有的研究报道绝大多数的在肝干/前体细胞中高表达蛋白质(共11个)在许多种癌细胞中高表达，包括6个在人肝癌中高表达。这些鉴定的蛋白质提示着干细胞和肿瘤之间的某种可能联系，从侧面表明肝癌从肝干/前体细胞(或肝癌干细胞)发生的可能，也将为肝癌干细胞的鉴定提供依据。 总之，本研究通过两种策略对肝癌干细胞的可能分子标志(已知的和未知的)进行了筛选研究，鉴定出高致瘤性c-met<+>CD45<->肝癌细胞亚群，提示c-met有可能作为肝癌干细胞的标志分子，而c-kit、CD44及CD133不能成为肝癌干细胞的标志分子；建立了一种快速、高效、简单、经济的方法来分离纯化肝干/前体细胞，鉴定出一组在肝干/前体细胞中高表达的与肝癌相关的蛋白质。这些研究结果将为肝癌干细胞的进一步鉴定打下基础。