【摘 要】
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目的：
本研究采用免疫组化方法,通过检测正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌组织中PTEN和p-AKT1蛋白的表达,分析二者表达的差异性和相关性,并探讨
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目的：
本研究采用免疫组化方法,通过检测正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌组织中PTEN和p-AKT1蛋白的表达,分析二者表达的差异性和相关性,并探讨二者表达与胃癌发生和转移之间的关系和临床病理意义。
方法：
临床病例收集及组织芯片制作:收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科手术切除胃癌标本134例(其中113例距癌灶边缘大于5cm处取配对正常胃黏膜作为对照),慢性萎缩性胃炎15例,肠上皮化生46例及异型增生5例。常规石蜡包埋,组织蜡块行4μm组织切片,常规HE染色,用于目标组织的定位。采用组织芯片制作仪构建胃癌及癌前病变组织芯片蜡块,行4μm连续切片。
免疫组化染色及结果判定方法:采用PV-9000免疫组化二步法检测正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中PTEN和p-AKT1蛋白的表达。兔抗人PTEN多克隆抗体购自博奥森公司,工作浓度为1:100,工作浓度1:100,兔抗人p-AKT1单克隆抗体购自博奥森公司,工作浓度1:100。免疫组化及DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司。用PBS缓冲液代替一抗做阴性对照。结果判定:PTEN和p-AKT1蛋白在细胞浆呈现清晰棕黄色特异性免疫反应颗粒为阳性细胞。每一病例随机选择2个高倍镜视野,计数200个细胞,阳性细胞占计数同类细胞百分率＜5%为0分,5%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,＞75%为4分。染色强度以阳性细胞呈色反应为准:无特异着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;然后按染色强度和阳性细胞所占的百分比的乘积将结果分为:0分为阴性(一);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++),9～12分为强阳性(+++)。
结果：
PTEN蛋白在胃癌组织(40.3%)表达阳性率显著低于正常胃黏膜(80.5%)、肠上皮化生(84.8%)和异型增生(100%),P＜0.05。胃癌组织中PTEN蛋白表达与胃癌患者的性别、年龄、胃癌的Borrmann分型、WHO组织学分型、Lauren分型、TNM分期均无显著相关(P＞0.05)。
p-AKT1蛋白在肠上皮化生(80.4%)和胃癌组织(73.1%)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(34.5%)(P＜0.05)。P-AKT1蛋白表达与胃癌患者的性别、年龄、胃癌的Borrmann分型、WHO组织学分型、Lauren分型、TNM分期均无显著相关(P＞0.05)。
结论：
PTEN和P-AKT1蛋白在胃癌和癌前病变中的差异表达提示其在胃癌发生过程中发挥作用,其具体机制尚需进一步深入研究。
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