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第一部分银杏叶提取物GBE50(及其主成分总黄酮)对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡及ROS生成的作用目的观察银杏叶提取物GBESO及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞ROS生成及凋亡的保护作用。方法通过消化法获得人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，传代后干预分组如下：N组(正常对照)，H组(缺氧24h)，HG组(缺氧前GBE50干预4h)和HF组(缺氧前总黄酮干预4h)，其中GBE50和总黄酮各有3个浓度：12.5、25及50μg／ml。采用流式细胞仪测各组ROS(活性氧)水平及早期凋亡率(AnnexinV)，通过TUNEL测晚期凋亡率，探讨缺氧及GBE50和总黄酮对内皮细胞凋亡及其ROS生成的影响。结果1．H组ROS水平较N组明显增加，由(9.88±0.97)％升至(29.27±2.21)％，有显著性差异(P＜0.05)；HG各浓度组与H组相比ROS水平均下降，但与N组及H组相比均无明显差异(P＞0.05)：HF各浓度组与H组相比ROS水平均明显下降(P＜0.05)，其中总黄酮浓度为50μg／ml时ROS水平降至最低，为(7.42±1.81)％。2．H组细胞AnnexinV阳性率较N组明显增加，由(9.00±1.00)％升至(18.47±2.53)％，有显著性差异(P＜0.05)；HG25μg／ml时为(10.69±2.08)％，显著降低了内皮细胞的AnnexinV阳性率(P＜0.05)；HF各浓度组均能不同程度地降低AnnexinV阳性率，但尚无统计学差异(P＞0.05)，该保护效应在总黄酮浓度为50μg／ml时最明显，AnnexinV阳性率为(14.25±2.22)％。3．H组TUNEL阳性率较N组明显增加，由(1.28±0.65)％升至(8.59±1.10)％，有显著性差异(P＜0.05)；HG 25μg／ml时降至(3.58±0.28)％，HF50μg／ml为(3.06±0.40)％，较H组均明显下降(P＜0.05)。结论缺氧可导致HUVEC ROS生成增加伴凋亡增多。而GBE 50及总黄酮可降低缺氧所致的ROS生成增多及凋亡增加，GBE50及总黄酮对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。第二部分银杏叶提取物GBE50对抗缺氧致内皮功能障碍的影响及部分机制探讨目的初步探讨银杏叶提取物GBE50对抗缺氧致人脐静脉内皮细胞功能障碍的分子机制。方法通过消化法获得HUVEC，传代后干预分组如下：N组(正常对照)，NG组(GBE50 25μg／ml干预4h后不予缺氧处理)，H组(缺氧24h)及HG组(GBE50 25μg／ml干预4h后缺氧24h)。应用RT-PCR半定量检测各组vWF(von willebrand因子)、ET-1(内皮素-1)及PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)的mRNA表达水平，运用Western-blot测各组eNOS(内皮型一氧化氮合酶)及PPARγ的蛋白表达水平。结果1．vWF的mRNA表达水平：N组为(0.55±0.05)％，H组为(0.84±0.14)％，H组vWF表达较N组明显增加(P＜0.05)；HG组为(0.58±0.24)％，与H组相比明显降低(P＜0.05)。2．ET-1的mRNA表达水平：N组为(0.14±0.03)％，H组为(0.31±0.03)％，H组ET-1表达较N组明显增加(P＜0.05)；HG为(0.26±0.02)％，与H组相比明显降低(P＜0.05)。3．eNOS蛋白表达水平：H组eNOS蛋白表达较N组明显增加，由(0.30±0.04)％升至(0.59±0.08)％，有显著性差异(P＜0.05)；HG组降至(0.43±0.08)％，但与其它各组相比无统计学差异(P＞0.05)。4．PPARγ的mRNA表达水平：N组为(0.40±0.02)％，H组为(0.42±0.01)％，HG组为(0.42±0.01)％，各组之间无差异(P＞0.05)。5．PPARγ的蛋白表达水平：N组为(0.10±0.02)％，H组为(0.13±0.05)％，HG组为(0.13±0.04)％，各组相比无改变(P＞0.05)。结论内皮细胞缺氧损伤时可导致ET-1、vWF及eNOS的表达增加，内皮细胞在缺氧前给予GBE50 25μg／ml后，可降低缺氧导致的ET-1、vWF的表达增加，部分降低因缺氧导致的eNOS蛋白表达的增高，提示缺氧及GBESO对上述因子的表达起作用。缺氧及GBE50对PPARγ的mRNA及蛋白水平均无影响，提示缺氧及GBE50不通过PPARγ途径起作用。第三部分银杏叶提取物GBE50在缺氧致内皮功能障碍中抗凋亡作用的初步研究目的探讨银杏叶提取物GBE50对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡信号分子mRNA表达水平的调节。方法应用人细胞凋亡基因表达谱cDNA芯片筛选出凋亡通路上的差异表达基因谱，再运用RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。结果1．基因芯片结果：缺氧干预内皮细胞24小时后，H组(缺氧24h)较N组(正常对照)上调了15个基因；而HG组(缺氧前4h予GBE 50 25μ／ml进行干预)较N组上调了38个基因，下调了69个基因。2．RT-PCR验证结果：内皮细胞经缺氧损伤后，ATM(毛细血管扩张性共济失调症突变基因)的mRNA表达由N组的(0.40±0.01)％升至H组的(0.47±0.09)％，H组较N组明显增加(P＜0.05)；HG组则降至(0.23±0.11)％，较H组明显降低(P＜0.05)。TNFSF10(肿瘤坏死因子超家族成员10)mRNA的表达N组为(0.05±0.01)％，H组为(0.20±0.13)％，H组较N组明显增加(P＜0.05)；HG组降至(0.01±0.01)％，较H组明显降低(P＜0.05)。结论ATM及TNFSF10两者mRNA水平表达的改变和缺氧及GBE50的干预密切相关。ATM及TNFSF10在缺氧致内皮细胞凋亡及GBE50抗内皮细胞凋亡中起到重要作用。