女贞子干预大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的研究

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  目的:本实验以改良的Allen法制造脊髓损伤大鼠模型,观察具有“滋补肝肾益髓填精”作用的中药女贞子对大鼠脊髓损伤后的神经保护作用和机制,为临床应用提供实验依据。   方法:选用90只健康SD大鼠,雄性,体重250±20g,实验动物分为假手术组,模型组和治疗组3组。治疗组取女贞子液(3.0g/Kg·d)腹腔注射,假手术组与模型组选用与治疗组相同体积的生理盐水腹腔注射。在造模成功后6个时间点:1h, 6h,24h,3d,6d,14d取出脊髓标本进行脊髓病理形态学观察,并通过免疫组织化学法检测脊髓组织中Hsp70的表达,其中于造模后6h测定脊髓组织中的SOD和MDA的含量。Hsp70的阳性表达率采用光密度值(OD值)检测。   结果:(1)使用女贞子液治疗后大体标本及HE染色观察显示脊髓的继发性损伤减轻。(2)Hsp70免疫组织化学结果显示:假手术组脊髓组织中 6h,24h,3d有少量Hsp70表达,3d以后几乎没有表达;模型组1h既有少量的Hsp70表达,6h表达增多,损伤后3d脊髓组织中Hsp70表达达到最高峰并维持至损伤后6d,Hsp70主要表达在脊髓灰质的神经细胞胞浆和少量的胶质细胞中;女贞子治疗组脊髓组织中Hsp70的表达在所有时间点较模型组明显增强,差异有统计学意义(p<0.05),且表达高峰提前至1d,同时脊髓白质神经纤维网也可见少量的 Hsp70表达。(3)脊髓损伤后6hSOD活力明显低于假手术组,与假手术组比较差异具有极显著性(p<0.01),治疗组SOD活力于损伤后6h明显高于模型组,与模型组比较差异有显著性(p<0.05);脊髓损伤后6hMDA含量明显高于假手术组,与假手术组比较差异具有极显著性(p<0.01),治疗组MDA含量于损伤后6h明显低于模型组,与模型组比较差异有显著性(p<0.05)。   结论:(1)改良Allen法制造大鼠脊髓损伤操作简单,模型稳定,可重复性好。(2)女贞子能显著改善大鼠脊髓损伤后组织病理学改变,能减轻脊髓因出血、水肿引起的继发性损伤,表明女贞子对大鼠脊髓损伤有明显的保护作用。( 3)女贞子可显著增强损伤部位脊髓组织Hsp70的大量表达,并且能扩大表达范围,提前表达高峰,可有效抑制神经细胞凋亡,提示女贞子诱导损伤后脊髓组织表达 Hsp70可能是女贞子保护脊髓损伤的作用机理之一。(4)女贞子能在脊髓损伤后早期有效清除自由基,表明女贞子具有抗氧化作用,降低自由基含量保护神经细胞。
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