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目的:感光细胞的死亡主要由凋亡调控,自噬作为机体的一种保护机制,可能参与其中,而钙蛋白酶活化可抑制自噬,本研究拟探索具有感光细胞保护效应的中药复方补精益视片调控钙蛋白酶活性进而恢复自噬以保护感光细胞凋亡的机制,以期为中医药在感光细胞保护研究领域提供一定科学依据和治疗靶点。方法:使用MUN腹腔注射建立大鼠光感受器细胞凋亡模型,随机分为4组(正常组,模型组,维生素A组,中药组)连续治疗14天。运用HE染色、TUNEL法观察补精益视片对视网膜感光细胞形态和凋亡情况;免疫组化技术检测视网膜组织中半胱氨酸蛋白酶-3、钙蛋白酶的表达,观察补精益视片调控钙蛋白酶活性对感光细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3在视网膜感光细胞中的蛋白表达,观察补精益视片对感光细胞自噬的作用。结果:1.造模后HE染色显示视网膜感光细胞视网膜总厚度减少,各层结构排列不规则,各层细胞层数减少甚至感光细胞层消失;Tunel法显示视网膜感光细胞凋亡数量逐渐增加,5d达到最大值,7d凋亡数量逐渐减少进入凋亡后期,表明模型造模成功。2.(1)正常组视网膜,各层结构清晰细胞排列整齐,未见肿胀;模型组视网膜总体厚度减少,各层结构排列紊乱疏松,各层细胞层数减少,结构不清晰;维A组和中药组,视网膜厚度改善不如正常组,但较模型组明显改善;中药组较维A组细胞排列较整齐紧密,结构清晰。(2)与正常组比较,每组视网膜感光细胞凋亡的平均光密度均增加,差异有统计学意义(p<0.05),提示细胞发生凋亡;与模型组比较,维A组和中药组视网膜感光细胞凋亡的平均光密度显著下降,差异有统计学意义(p<0.05),细胞凋亡水平下调;与维A组比较,中药组视网膜感光细胞凋亡的平均光密度下降,发生凋亡的细胞减少,差异有统计学意义(p<0.05)。TUNEL检测结果:模型组>维A组>中药组>正常组。(3)中药组的calpain评分1~2分,caspase-3评分3~6分;维A组calpain评分4~5分,caspase-3评分6~8分;模型组calpain评分4~6分,caspase-3评分9~12分;正常组:calpain评分0~1分,caspase-3评分0~2分;中药组钙蛋白酶活性降低,caspase-3被抑制,表明对钙蛋白活性的调控,可以调控感光细胞凋亡,且补精益视片能抑制钙蛋白酶活性,下调感光细胞凋亡,优于维生素A组。caspase-3得分:模型组>维A组>中药组>正常组;calpain得分:模型组≈维A组>中药组>正常组。(4)中药组LC3蛋白灰度值比其他组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中药组比较,维A组、正常组、模型组LC3蛋白表达灰度值均减小,差异有统计学意义(P<0.05),LC3表达:中药组>正常组>维A组>模型组;表明补精益视片可以调控自噬,使自噬水平上升且维A组自噬水平不如中药组;说明自噬途径也可能参与感光细胞凋亡,且自噬水平上升能抑制凋亡。结论:MUN诱导的大鼠视网膜感光细胞凋亡模型中钙蛋白酶被激活,继而上调caspase-3活性,下调LC3的表达,抑制感光细胞自噬,从而发生凋亡。补精益视片可能通过降低钙蛋白酶活性,下调caspase-3表达,增加LC3含量,以发挥恢复自噬、减少感光细胞凋亡的保护作用。