【摘 要】
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该文系统研究了猪体细胞核移植技术的相关环节,并对其中的某些条件进行了优化.初步建立了相关的技术体系,为后期实验的开展奠定了坚实的基础.该实验建立了小香猪耳上皮细胞、
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该文系统研究了猪体细胞核移植技术的相关环节,并对其中的某些条件进行了优化.初步建立了相关的技术体系,为后期实验的开展奠定了坚实的基础.该实验建立了小香猪耳上皮细胞、胎儿成纤维细胞和荣昌猪耳上皮细胞、颗粒细胞三种体细胞细胞系.在实验中初步探索了在体外条件下对上述三种细胞进行原代培养、传代培养、细胞纯化、细胞周期同期化处理及冷冻保存的方法.结果表明三种细胞的培养效果均与接种密度有关.颗粒细胞对此尤为敏感,当接种密度低于5×10<4>/ml时,很难达到汇合期并继续传代.耳上皮的分生能力最强,胎儿成纤维细胞则介于两者之间.冷冻对细胞有损伤,解冻后有近50％的细胞死亡且第一次传代时细胞的生活力明显下降,表现为生长速度降低,但在后续的传代过程中可以恢复.我们还通过脂质体介导法获得了转绿色荧光蛋白(GFP-neo)基因的胎儿成纤维细胞系,并初步比较了不同浓度G418及筛选方法对细胞纯化效果的影响.结果表明在一定范围内阳性率随基因量的增加而增加.传代培养时间向培养液中添加300μg/ml G418可获得较好的筛选效果.
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