基因表达谱芯片在肾脏移植免疫中的应用研究

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目的:研究和探索与肾脏移植免疫相关的差异表达基因。方法:选取肾移植术后4—6周患者30例为移植术后组;选择PRA(群体抗体反应)>85%的患者30例为免疫高敏组;正常献血员为正常对照组,均采新鲜血液。用PVP自然沉降法提取白细胞,标本均置于液氮罐保存。采用一步法提取总RNA,用荧光染料Cy3-dUTP标记正常对照白细胞总RNA,用Cy5-dUTP分别标记移植术后组和免疫高敏组总RNA。逆转录标记cDNA探针。采用高通量基因表达谱芯片(16,920点基因)进行芯片杂交,并用ScanArray4000扫描仪扫描芯片,分别得到移植术后组和免疫高敏组的Cy3/Cy5图像文件,通过划格确定杂交点范围,过滤背景噪声,提取基因表达的荧光信号强度值。ArrayPro Analyzer 4.0分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值。结果:移植术后组基因差异性表达显示基因433条(2.55%),上调基因26条,其中已知基因11条,未知基因15条,下调基因407条,其中已知基因252条,未知基因155条。免疫高敏组基因差异性表达显示基因877条(5.18%),上调基因88条,其中已知基因55条,未知基因33条;下调基因789条,其中已知基因510条,未知基因279条。结论:运用高通量、大规模基因表达谱芯片分析和研究基因表达谱系,能够有效筛选有关移植免疫方面的相关基因。
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