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目的 1.通过对膜穿透肽的分子组成及结构特点分析,摸拟设计新型膜穿透肽序列,为寻找更多更有效的多肽类载体奠定基础。 2.通过对新型膜穿透肽的穿膜功能及穿膜特性研究,为今后将其作为载体应用提供实验室数据,同时也为进一步探讨膜穿透肽的穿膜机制提供线索。 方法 利用蛋白质分析软件Peptool life对人量膜穿透肽序列进行系统分析,掌握其空间结构及理化性质特点,并结合各种氨基酸的结构、性质特征,设计合成具有更强穿透能力的膜穿透肽类似物。然后用此合成肽与体外培养的大鼠肝细胞在不同环境条件下进行共育,观察其穿膜运动情况,通过免疫荧光染色法检测鉴定。最后在计算机Photoshop软件上,测量细胞荧光灰度值,并应用SPSS软件进行统计分析,研究其穿膜能力与温度、浓度、时间及细胞功能状态之间的关系。 结果 1.这种膜穿透肽类似物不仅能穿过细胞膜,而且对甲醛固定后的细胞仍可穿透。 2.温度在0℃、4℃、25℃、37℃下,这种膜穿透肽类似物均可穿过细胞膜。 3.当此膜穿透肽类似物的浓度为0.01μmol/L时即可在细胞中检测到,而且浓度为1μmol/L组与浓度为10 μmol/L组,多肽进入细胞的量差别不显著。 4.此膜穿透肽类似物与细胞共育2min即可在细胞中检测到。而且共育时间为5min组与共育时间为15min组,此合成肽在细胞中的含量差别不显著。结论 1.这种新刑膜穿透肽具有穿膜能力强、穿透速度快的特点,可成为一种新的有效的多肽类载体。 2.此膜穿透肽的穿膜过程不依靠受体介导、不依赖ATP提供能过,也不足通过内吞作用来完成。 3.此膜穿透肽的穿膜运动不需要细胞中蛋肉类物质的参与。